蒲公英多糖的超滤分离及其清除自由基的作用研究

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1、蒲公英多糖的超滤分离及其清除自由基的作用研究作者：杨晓杰，陈静，程加春，李学花【摘要】目的研究蒲公英多糖的超滤分离和自由基的清除作用。方法采用不同孔径的超滤膜分离蒲公英多糖，用Fenton反应体系和邻苯三酚自氧化法测定对羟自由基和超氧阴离子的清除作用。结果超滤分离得到蒲公英多糖3个组分，测定了组分DP1和DP2对自由基的清除作用，两组分对羟自由基清除作用强，且DP1高于DP2；两组分清除超氧阴离子的效果不明显，DP1略高于DP2。结论超滤膜能较好地分离蒲公英多糖，其中DP2组分多糖含量较高，占53.

2、71%。DP1和DP2组分均能清除羟自由基和超氧阴离子，对羟自由基清除能力较强，且DP2高于DP1，当浓度达到5mg/ml时，DP2的清除率达到61.21%。【关键词】蒲公英多糖；超滤分离；羟自由基；超氧阴离子　　Abstract：ObjectiveToresearchontheabilitytoscavengefreeradicalofdandelionpolysaccharidebyultrafiltrationseparation.MethodsDandelionpolysaccharidee

3、mbraneofdifferentaperture,andthescavengingeffectonhydroxylfreeradicalandsuperoxideanionfreeradicalinedbyFentonsystemandthepyrogallolautoxidationmethod.ResultsThreepartsembrane.TheabilitytoscavengefreeradicalofDP1andDP2ined.Tembrane.DP2hashigherpolysacc

4、haridecontentaccountingfor53.71%.Hydroxylfreeradicalandsuperoxideanionfreeradicalcanbescavengedorepog/ml.　　Keymongolicum是菊科舌状花亚科多年生草本,全草均可入药,有清热解毒、止痛散淤等功效,是中医临床上常用的中草药。蒲公英根、叶、花3种器官的多糖都有一定的清除自由基的活性［3］。本文主要通过超滤分离将蒲公英根多糖分为两个组分，研究并对比了其清除羟自由基和超氧阴离子的活性。　　1材料

5、与仪器　　1.1材料蒲公英，采自黑龙江省五大连池市。　　1.2器材UEiP503、UEOS503型中空纤维膜组件，752N紫外可见分光光度计。　　2方法　　2.1多糖提取工艺流程蒲公英根干粉→热水浸提→离心分离→微滤→超滤分离→乙醇沉淀→脱蛋白→真空干燥→蒲公英粗多糖。　　2.2超滤及其预处理浸提液在超滤前用0.45μm微滤膜除去粗提液中的固形物以降低对超滤膜的污染。控制超滤压力为0.08MPa，将蒲公英多糖的浸提液先用孔径10KDa的超滤膜进行超滤处理。滤过液继续采用6KDa的超滤膜进行超滤处理，

6、分别测定10KDa超滤膜的截留液、6KDa超滤膜的截留液、6KDa超滤膜的滤过液中的总糖、还原糖含量，计算各部分多糖含量，分析蒲公英多糖的大致分子量分布情况。图1显示了各部分的比例和含量。　　2.3多糖含量的测定总糖含量的测定采用蒽酮－浓硫酸法［4］；还原糖含量的测定采用3,5－二硝基水杨酸比色法［4，5］。　　多糖含量=总糖含量-还原糖含量［6］　　2.4蛋白含量的检测蒲公英粗多糖溶液经木瓜蛋白酶和三氯乙酸（TCA）脱蛋白后，测定其在260nm和280nm处的吸光值［7］。　　2.5多糖清除·OH

7、的测定清除·OH试验的方法：采用Fenton反应体系［8］。清除率E(%)计算公式为：　　E(%)=［A0－(Ax－Ai)/A0］×100%　　式中：A0为空白对照液的吸光度；Ax为加入多糖溶液后的吸光度；Ai为不加显色剂H2O2多糖溶液的本底的吸光度。　　2.6多糖清除O2-·的测定多糖清除O2-·的试验采用邻苯三酚自氧化法［9］。清除率E(%)计算公式为：　　E(%)=(A对照－A样品)/(A对照－A空白)　　式中：A空白空白组的吸光度；A对照为对照组的吸光度；A样品为多糖液的吸光度。　　3结果

8、　　3.1蒲公英多糖的分子量分布称取30g蒲公英根粉末加入30倍的水80℃浸提两次，3h/次。浸提液经抽滤后加水定容至1500ml。浸提液中总糖含量为2.14mg/ml,还原糖的含量为0.31mg/ml,多糖含量为1.83mg/ml。根据上述超滤方法得到蒲公英多糖不同组分多糖分布如图1所示。　　由图1可知，蒲公英多糖分子量大于10KDa(DP1)占蒲公英多糖的35.50%，分子量在6KDa与10KDa之间(DP2)占蒲公英多糖的53.71%，而分子量小于6KDa(DP