不同薤白多糖体外对自由基的清除作用

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1、第4卷第3期热带生物学报V01．4No．32013年9月JOURNALOFTROPICALBIOLOGYSep．2013文章编号：1674—7054(2013)03—0257—04不同薤白多糖体外对自由基的清除作用郑如刚，梁振益，陈神平，林昭华，邓世明(1．海南大学材料与化工学院／热带多糖资源利用教育部工程研究中心，海南海口570228；2．海南大学海洋学院，海南海口570228)摘要：采用二苯代苦味酰肼自由基(DPPH·)法和邻二氮菲一Fe“一H0体系法，研究薤白粗多糖(cAMP)、半纯多糖(AMP)和2种纯化多糖(AMP—I，AMP—II)对自由基的清

2、除作用。结果表明，4种薤白多糖均能清除DPPH·和OH·，并随着质量浓度的增加清除作用增强，其中cAMP的清除作用最强，AMP和较低相对分子质量多糖(AMP—I)的清除率较接近。关键词：薤白多糖；二苯代苦味酰肼自由基；羟自由基；抗氧化活性中图分类号：TS201．4文献标志码：A薤白为百合科植物小根蒜AlliummacrosttemonBge．或薤AlleumchinensisG．Don的干燥鳞茎。性味辛、苦、温，有温中通阳，理气宽胸，通阳散结之功效¨j，是一味传统的中药。薤白耐瘠耐旱，在我国分布广泛，而且药食两用，是卫生部2002年公布的88种药食两用中药

3、材之一(卫生部文件卫法监发[2002]51号)，具有较大的开发价值。现代研究证明，薤白具有抗氧化、调血脂、防治动脉粥样硬化等作用。已经从薤白中，分离得到皂苷、含氮化合物、前列腺素以及挥发油等化学成分，但少见有关其多糖的报道。随着分子生物学和细胞生物学的发展，多糖作为支持组织和能量来源的传统观念早已被突破，被认为是生物体内的又一类重要的功能性大分子。药理和临床研究表明，多糖具有增强免疫功能、抗肿瘤、抗凝血、抗氧化、抗衰老等广泛的生物活性_4]，云芝多糖、猪苓多糖、香菇多糖、茯苓多糖等某些多糖已应用于临床，因此，对活性多糖的研究已13益受到重视。由于多糖的结构

4、复杂，制备方法和过程会影响其结构，而结构的变化也会影响多糖的活性，这也是活性多糖研究的一个方向和难点。笔者研究了薤白粗多糖(cAMP)、半纯多糖(AMP)和2种精制多糖(AMP—I，AMP．m)对二苯代苦味酰基(DPPH)和羟自由基的清除作用，旨在了解不同多糖对自由基的作用及其机理，为薤白的研究与开发提供科学依据。1材料与方法1．1原料薤白购于海南省寿南山医药公司，经海南大学制药工程系邓世明教授鉴定为中药薤白小根蒜。薤白于常温下通风干燥，并研磨成粉，密封常温保存备用。1．2试剂1，1一二苯基苦基苯肼自由基(1，1一diphenyl一2一picrylhydr

5、azyl，DPPH，美国sigma公司)；木瓜蛋白酶(活性16000U·g)；无水乙醇、苯酚、正丁醇、氯仿等试剂均为分析纯；水为蒸馏水。1．3主要仪器uV一2450型紫外一可见分光光度计(Et本岛津有限公司)；N一2000旋转蒸发仪(日本东京理化有限公司)；DL一5型低速离心机(上海仪器仪表公司)。1．4薤白多糖的提取称取薤白粉末100g，加=75％的乙醇回流2h，提取液减压过滤，药渣再用热水提取，浓缩滤液得薤白粗多糖(cAMP)。收稿日期：2013—05—06基金项目：海南省重点科技计划项目(ZDXM20100041)作者简介：郑如刚(1987一)，男，

6、四川内江人，海南大学材料与化工学院2010级硕士研究生．通信作者：陈神平，海南大学材料与化工学院教授，硕士生导师．E—mail：chen—yiping@tom．tom258热带生物学报2013正1．5薤白粗多糖的分离按文献[5]的方法进行，用木瓜蛋白酶+sevag法对多糖中的蛋白进行去除，再用HO法脱色。脱色后溶液中加入无水乙醇到80％以上，静置，过滤，洗涤，再将所得多糖沉淀透析后醇沉，最后干燥得薤白半纯多糖(AMP)。1．6薤白多糖的分级纯化按文献[6]的方法，AMP溶解于蒸馏水中，离心取上清液。使溶液中乙醇的体积分数分别为40％，50％，60％，并分别

7、收集各部分沉淀。经透析、干燥得到薤白纯化多糖AMP．I(质均相对分子质量Mp为15．7×10)、AMP．m(质均相对分子质量Mp为154．4×10。)。1．7糖含量的测定按文献[7]的方法，以葡萄糖为对照，用苯酚一硫酸法对薤白多糖的含量进行测定。1．8薤白多糖体外清除DPPH自由基的测定按照文献[8]的方法稍加改进。二代苦味酰基自由基(DPPH·)是一种稳定的自由基，其乙醇溶液呈深紫色。抗氧化预期效果模式为：DPPH·+AH=DPPH．H+A·，依据DPPH自由基具有单电子，在517nm处有一强吸收(深紫色)，当自由基清除剂与其单电子配对使其紫色逐渐消失，

8、其褪色程度与其所接受的电子数成定量关系，因而可以用分光光度法进行定