人胚胎造血的agm区基质细胞基因表达谱分析

《人胚胎造血的agm区基质细胞基因表达谱分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、人胚胎造血的AGM区基质细胞基因表达谱分析作者：付劲蓉，陈惠芹，张绪超，黄绍良，周敦华，黄科【摘要】　　为了筛选在主动脉-性腺-中肾（AGM）区基质细胞中差异表达的基因，以药物流产的孕30-35天的人胚胎AGM区来源基质细胞为“实验方”，以源自意外而致流产的孕4-5月的水囊引产的胎儿肝组织的基质细胞为“驱动方”，建立了在人AGM区基质细胞中差异表达基因的消减杂交文库。进一步用基因芯片技术对所建立的抑制消减杂交文库进行筛选，并挑选其中明显差异表达的18个克隆进行序列测定和同源性分析。结果表明：在所构建的AGM抑制消减杂交文库中，经过PCR鉴定有特异性扩增带且扩增带分子量在200-700bp的克

2、隆有211个，阳性率高达76.4％。经过基因芯片筛选，挑选出ratio值大于5的克隆共18个进行序列测定显示，在测序的18个明显差异表达的阳性克隆中，4个为未知基因，14个为已知基因，其中这些已知基因分别参与了细胞迁移、分化、生长、细胞周期、信号转导及血管发生等细胞重要生命过程。这些基因大多数在胚胎分化造血发育中的作用尚未见报道。结论　筛选AGM区基质细胞中差异表达的基因为进一步研究胚胎造血发育的分化调控的分子机理提供了必要的理论基础。【关键词】AGM区；胎肝；基质细胞；抑制消减杂交；基因芯片　　ScreeningandCloningtheGenesDifferentiallyExpress

3、edinHumanEmbryonicAGM-DerivedStromalCells　　AbstractToscreenandseparatethegenesdifferentiallyexpressedinhumanembryonicaorta-gonad-mesonephros(AGM)-derivedstromalcells，asubtractedlibraryanembryonicAGM-derivedstromalcellsastargetandhumanfetalliver(FL)-derivedstromalcellsasdrivers.Thenahighthoughscreen

4、ingtechnique，genechip，ately18oftheresultingsubtractedcDNAclonestheestablishedsubtractivelibrary，thepositiveratioountto76.4%.18over-expressedgenesorethana5-folddifferenceexpressionlevelsbetalcells，andongthesequencedclones，14sequencesigration，celldifferentiation，cellproliferation，cellcycle，signaltran

5、sduction，andangiogenesis.Mostofthesegeneshavenotbeenreportedtorelatetothehaematogenesisinontogeny.Itisconcludedthatmanygenesbothknoanembryonicaorta-gonad-mesonephros-derivedstromalcells.Discoveryofthesegenesprovidesasolidfoundationtoelucidatethemechanismofhaematogenesisinontogeny.　　Keyalcell；suppre

6、ssionsubtractivehybridization;genechip主动脉-性腺-中肾（aorta-gonad-mesonephros，AGM）区近年来被认为是永久造血干细胞（definitiveHSC）出现的最早区域，为胚胎造血发生提供了必要的启始条件［1］，正成为国际上造血分化机理研究中的热点［2，3］，但其具体的分子机制仍不清楚。本研究建立了人AGM及胎肝（fetalliver，FL）基质细胞的抑制消减杂交文库，为阐明胚胎造血发育的分化调控的分子机理提供线索。　　材料和方法　　主要试剂　　IMDM培养基及胎牛血清均购自Gibco公司。总RNA提取试剂TRIZOL购自上海生工公司

7、。mRNA分离试剂盒-OligotexmRNAkit购自德国Qiagen公司，抑制消减杂交试剂盒PCR-SelectTMcDNAsubtractionkit购自购自美国Clontech公司。A-Tclone试剂盒InsT/AcloneTMPCRproductkit购自立陶宛Fermentas公司。大肠杆菌JM109购自大连TaKaRaBiotech公司。　　基质细胞　　按照本室方法建立的人AGM区基质细胞（h