人类角膜缘干细胞对外周血淋巴细胞作用的实验研究

《人类角膜缘干细胞对外周血淋巴细胞作用的实验研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、人类角膜缘干细胞对外周血淋巴细胞作用的实验研究关键词：人类角膜　　【摘要】目的观察体外培养的人类角膜缘干细胞对同种异体外周血淋巴细胞的作用。方法通过植片技术分离人角膜上皮细胞以及角膜缘干细胞。在两种细胞单层上，观察同种异体外周血淋巴细胞对丝裂原刀豆蛋白Ａ（ConA）的增殖反应。另外，将两种细胞培养上清直接转移到由ConＡ刺激的淋巴细胞增殖系统，以观察两种细胞释放某些因子的抑制效应。结果单层角膜缘干细胞对ConＡ刺激的外周血淋巴细胞增殖反应可以施加有效的抑制效应。角膜缘干细胞培养上清对ConＡ刺激的外周血淋巴细胞增殖系统，在72h分离上清显示

2、有明显抑制效应。结论角膜缘干细胞通过细胞交互作用和（或）释放某些抑制性因子对淋巴细胞的活化和增殖发挥潜在的抑制作用。　　【关键词】角膜上皮细胞;角膜缘干细胞;细胞培养　　Studiesonthekeratolimbalstemcelltothepericirculationlymphocyteactivationandproliferation　　　【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheregulationofhostlymphocyteactivationbytheallograftoflimbalstem

3、cells.MethodsLimbalstemcellsandthecornealepithelialcellshumancorneasbyexplanttechnique.Themediumsofeachcellseandein-20℃afterpurification.LymphocytesoftheotherbodyediumsstimulatedbyConA.Limbalstemcellsorthecornealepithelialcellsofthehumanphocytesfromtheotherbodysblood.Lymp

4、hocyteproliferationassayetricdetermination.ResultsSignificantproliferationofthelymphocytesthelimbalstemcellsorthecornealepithelialcellsphocytesproliferation.Themonolayerdomesticrabbitslimbalstemcells,shophocytesproliferationaftermixedlymphocyteculturefor48h,butthispheno

5、menoncouldntbeseeninthemonolayercornealepitheliuminvitro.ConclusionTheresultsshoechanismsthatphocytesproliferation,butmainlybycell-cellinteractionand/orsomeothersolublefactors,andlimbalstemcellsmunity.　　【Key;limbalstemcell;cellculture　在比较联合角膜缘的穿透性角膜移植与单纯大植片角膜移植的术后植片存活率的比

6、较时发现，前者的排斥反应发生率低［1，2］，其机制尚未见研究报道，是否因为角膜缘干细胞有抑制淋巴细胞生长的功能，亦尚无此方面研究报道，我们前期的实验证实兔角膜缘干细胞可通过细胞交互作用和（或）释放某些抑制性因子抑制同种异体兔淋巴细胞的活化和增殖［3］。本实验旨在观察人类同种异体角膜缘干细胞对宿主淋巴细胞活化和增殖的调节效应，并进一步从实验室体外培养角度证实角膜缘干细胞与角膜上皮细胞相比在引起同种异体排斥反应中的作用。　　1材料与方法　　1.1人角膜缘干细胞的培养及条件培养基的制备在无菌条件下取新鲜人角膜，将角膜分为中央和角膜缘组织，去除角膜

7、内皮细胞以及后2/3角膜板层后，将组织切成1mm×2mm，上皮细胞面向下置于12孔培养板中，每孔有3块组织。加入少量完全细胞培养基（RPMI-1640培养基，10%胎牛血清，1ml双抗），切勿使组织块漂浮。在37℃体积分数为5%CO2和95%空气条件下进行培养，培养基每1天更换1次，6天去除接种组织块。当细胞形成单层达70%以上时，用0.25%胰蛋白酶和0.04%EDTA液（1∶2）消化传代。在12孔板选择生长良好汇合的传代细胞。在12h内使用无血清RPMI-1640培养基换液3次以去除残留的培养基。然后，每孔加入新鲜无血清培养基2ml，继

8、续培养，每24h收集上清1次，共收集5次。2000ｒ/min离心10min，取上清液，去除细胞碎屑，加入1g/L质量浓度牛血清白蛋白（FBS）。使用3.47μm分子截流量透析袋透