反义at1r重组腺病毒对人肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

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1、反义AT1R重组腺病毒对人肺动脉平滑肌细胞增殖的影响：许大国,朱润庆,涂明利　[摘要]目的:研究腺病毒介导反义AT1RcDNA转染对人肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）增殖的影响。方法:构建重组反义人AT1R腺病毒(AdCMVahAT1)和表达β-半乳糖苷酶的对照载体AdCMVLacZ，将培养的PASMCs分为DMEM组、ATⅡ组、AdCMVLacZ+ATⅡ组和AdCMVahAT1+ATⅡ组，分别给予相应的干预因素，用RT-PCR和免疫组化检测AT1R的表达，用流式细胞仪检测各组PASMCs的增殖指数。结果:转染病毒后48hAT1R蛋白表达在AdCMVahAT

2、1组显著低于AdCMVLacZ组和DMEM组。给予ATⅡ刺激48h，ATⅡ组PASMCs的增殖指数（59.69±3.46）高于DMEM组（50.25±1.34，P<0.01），转染AdCMVahAT1后再用ATⅡ刺激48h的AdCMVahAT1+ATⅡ组PASMCs的增殖指数（24.67±3.19）则显著低于3个对照组（P<0.01）,而AdCMVLacZ+ATⅡ组（59.53±3.26）和ATⅡ组比较无显著性差异。结论:反义AT1R通过抑制AT1R的表达而抑制PASMCs增殖。　　[关键词]反义AT1R；肺动脉；平滑肌细胞；增殖　　Abstra

3、ct:ObjectiveToinvestigatetheinfluenceofhumanangiotensinⅡ(ATⅡ)type1receptor(AT1R)antisensecDNA(ahAT1)onproliferationofculturedhumanpulmonaryarterysmoothmusclecells(PASMCs).MethodsTanAT1RmRNA,andAdCMVLacZcontainingLacZ,ologousrebination.ThePASMCsmunohistochemistrymethod.Proliferation

4、index(PI)inedbyfloetry.ResultsAftertransfected48h,AT1RexpressionulatedbyATIIfor48h,ingroupATⅡthePIofPASMCsmarkedlyincreased(P<0.01VsgroupDMEM).Hoarkedlydecreased(P<0.01VsgroupATⅡandgroupDMEM,respectively).ThereanAT1receptorantisensecDNAmaydecreaseproliferationinhumanPASMCsbyi

5、nhibitingAT1Rexpression.　　Keyonaryartery;Smoothmusclecell;Proliferation　　肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)肥大增殖，肌型血管中层增厚，非肌型血管向肌型转化，是肺血管重建、肺动脉高压(PAH)形成的重要环节[1]。血管紧张素Ⅱ（ATⅡ）是PASMCs结构和功能异常及肺动脉重建的关键因子之一，其作用主要通过其1型受体（AT1R）而实现[2]。研究表明，FAK[3]、BMP[4]、DCA[5]可以抑制PASMCs增殖，从而逆转PAH的血管重建。然而，重组腺病毒介导反义AT1R对PASMCs的增

6、殖的影响报道较少，我们对此进行了研究，报道如下。　　1材料与方法　　1.1主要材料、试剂和仪器重组反义人AT1R腺病毒（AdCMVahAT1，滴度8.2×1014pfu/L）和对照腺病毒载体（AdCMVLacZ，滴度9.0×1014pfu/L）。兔抗人AT1R抗体购自SantaCRUZ公司，兔抗人SM-α-actin单抗及免疫组化S-P试剂盒等购自北京中山生物技术有限公司。PCR扩增仪(PERKINELMER5700SequenceDetectertor,美国)，倒置相差显微镜（OlympusIX-70，日本），彩色图像分析仪（Opten,德国），流式细胞仪

7、（BeckmanEpicsXL,美国）。　　1.2PASMCs的培养及实验分组原代培养的人PASMCs取自胸外科肺癌手术的肺动脉3级分支，采用组织贴壁法培养。经形态学和特异性兔抗人α-SM-actin免疫组化鉴定，呈特异性“峰、谷”状生长，所有细胞胞浆内均有被染成棕黄色的丝状物，证实为人PASMCs。传代培养至第4代用于实验。用分子克隆及细菌内同源重组技术，构建、制备反义人AT1R腺病毒(AdCMVahAT1)[6]。实验分AdCMVahAT1组、AdCMVLacZ组、DMEM组和ATⅡ组。待细胞生长至80%融汇时，前2组按感染复数100分别转染AdCMVa

8、hAT1和AdCMVLacZ病毒液，DMEM组加等体