反义at1r 重组腺病毒对人肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

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1、反义AT1R重组腺病毒对人肺动脉平滑肌细胞增殖的影响作者：许大国,朱润庆,涂明利　[摘要]目的:研究腺病毒介导反义AT1RcDNA转染对人肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）增殖的影响。方法:构建重组反义人AT1R腺病毒(AdCMVahAT1)和表达β-半乳糖苷酶的对照载体AdCMVLacZ，将培养的PASMCs分为DMEM组、ATⅡ组、AdCMVLacZ+ATⅡ组和AdCMVahAT1+ATⅡ组，分别给予相应的干预因素，用RT-PCR和免疫组化检测AT1R的表达，用流式细胞仪检测各组PASMCs的增殖

2、指数。结果:转染病毒后48hAT1R蛋白表达在AdCMVahAT1组显著低于AdCMVLacZ组和DMEM组。给予ATⅡ刺激48h，ATⅡ组PASMCs的增殖指数（59.69±3.46）高于DMEM组（50.25±1.34，P<0.01），转染AdCMVahAT1后再用ATⅡ刺激48h的AdCMVahAT1+ATⅡ组PASMCs的增殖指数（24.67±3.19）则显著低于3个对照组（P<0.01）,而AdCMVLacZ+ATⅡ组（59.53±3.26）和ATⅡ组比较无显著性差异。结论:反

3、义AT1R通过抑制AT1R的表达而抑制PASMCs增殖。　　[关键词]反义AT1R；肺动脉；平滑肌细胞；增殖　　Abstract:ObjectiveToinvestigatetheinfluenceofhumanangiotensinⅡ(ATⅡ)type1receptor(AT1R)antisensecDNA(ahAT1)onproliferationofculturedhumanpulmonaryartery12smoothmusclecells(PASMCs).MethodsTworecombi

4、nantadenoviralvectors,AdCMVahAT1containingfulllengthantisensecDNAtargetingtohumanAT1RmRNA,andAdCMVLacZcontainingLacZ,wereconstructedbyorientationcloneandhomologousrecombination.ThePASMCswasdividedinto4groups(DMEM，ATⅡ，AdCMVLacZ+ATⅡandAdCMVahAT1+ATⅡ)andc

5、orrespondinginterventionweregiventodifferentgroups,respectively.AT1RexpressionwasdetectedbyRT-PCRandimmunohistochemistrymethod.Proliferationindex(PI)weredeterminedbyflowcytometry.ResultsAftertransfected48h,AT1RexpressionwassignificantlylessinPASMCstran

6、sfectedAdCMVahAT1thanthatingroupDMEMandingroupAdCMVLacZ(P<0.01).StimulatedbyATIIfor48h,ingroupATⅡthePIofPASMCsmarkedlyincreased(P<0.01VsgroupDMEM).However,ingroupAdCMVahAT1+ATⅡ,PIofPASMCsmarkedlydecreased(P<0.01VsgroupATⅡandgroupDMEM,respectiv

7、ely).TherewerenosignificantdifferencesofPIbetweengroupAdCMVLacZ+ATⅡandgroupATⅡ.ConclusionHumanAT1receptorantisensecDNAmaydecreaseproliferationinhumanPASMCsbyinhibitingAT1Rexpression.　　Keywords:AntisenseAT1R;Pulmonaryartery;Smoothmusclecell;Proliferatio

8、n12　　肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)肥大增殖，肌型血管中层增厚，非肌型血管向肌型转化，是肺血管重建、肺动脉高压(PAH)形成的重要环节[1]。血管紧张素Ⅱ（ATⅡ）是PASMCs结构和功能异常及肺动脉重建的关键因子之一，其作用主要通过其1型受体（AT1R）而实现[2]。研究表明，FAK[3]、BMP[4]、DCA[5]可以抑制PASMCs增殖，从而逆转PAH的血管重建。然而，重组腺病毒介导反义AT1R对PASMCs的增殖的影响报道较少，我们对此进行了研究，报道如