人组织激肽释放酶基因重组腺病毒转染对血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

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1、·662·中国病理生理杂志ChineseJournalofPathophysiology2010，2(I±)．662二鱼[文章编号]1000—4718(2010)04—0662—07人组织激肽释放酶基因重组腺病毒转染对血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响球谢良地，余惠珍一，朱鹏立，许昌声，王华军，李体远(福建医科大学附属第一医院福建省高血压研究所，福建省立医院干部特诊二科，福建福州350001)[摘要】目的：探讨重组腺病毒介导的人组织激肽释放酶(hKLK1)基因转移对血小板源性生长因子一BB(PDGF—BB)诱导下的自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和迁移的影响。方法：自行

2、构建双顺反子重组腺病毒载体，携带强绿色荧光蛋白(EGFP)标志基因和目的基因hKLK1；用细胞计数法和四甲基偶氮唑盐(MTr)比色法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞生长周期；蛋白免疫印迹法(Westernblotting)测定细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白p27、p21Cipl的表达。采用改良Boyden微孑L膜双槽法测定VSMC。迁移。结果：(1)hKLK1基因转移呈感染复数依赖性(20—100MOI)抑制PDGF—BB诱导的VSMCs生长，100MOI时抑制率为39．3％；呈时间依赖性抑制VSMC生长，第5d时达高峰，抑制率为35．2％。(2)hKLK1基因转移可显著抑制PDGF—BB诱

3、导的VSMCsHR增殖，峰值抑制率为30．2％(P<0．01)；细胞周期阻滞于G。／G期的VSMCsR明显增多，最大阻滞率为36．4％(P<0．O1)，而缓激肽B，受体特异性阻断剂Hoel40逆转了hKLK的抑制作用。(3)hKLK1基因转移明显上调PDGF—BB诱导VSMC的p27、p21表达，Hoel40明显降低p27、p21“表达。(4)hKLK1基因转移可明显抑制PDGF—BB诱导的VSMC细胞迁移，抑制率为34．6％，且Hoel40不影响该抑制作用。结论：hKLK1基因转移可抑制PDGF—BB诱导的VSMC增殖，主要由缓激肽B受体介导的，通过上调细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白p27

4、、p21Cipl表达的途径。而hKLK1基因转移抑制VSMC迁移效应可能不通过B：受体。【关键词]组织激肽释放酶1；基因转移；细胞增殖；细胞迁移；血管平滑肌细胞[中图分类号]R363[文献标识码]Adoi：10．3969／j．issn．1000—4718．2010．04．008Efectsofhumantissuekallikeringenedeliveryonproliferationandmi—grationofvascularsmoothmusclecellsXIELiang—di，YUHui—zhen，ZHUPeng—li，XUChang—sheng，WANGHua—jun，LIT

5、i—yuan(HypertensionInstitutionofFufian，孤eFirstAfiliatedHospitalofFufianMedicalUnwe~ity，TheSecondMedicalDepart—ment，ProvincialClinicalCollege，Fuzhou350001，China．E—mail：yhz200333@yahoo．corn．cn)[ABSTRACT]AIM：Toinvestigatetheeffectsofadenovirus—mediatedhumantissuekallikerin(Ad—hKLK1)genedeliveryonthep

6、roliferation，migrationofVSMCsHRinducedbyplateletderivedgrowthfactor—BB(PDGF—BB)．METHODS：TheVSMCsHRproliferationinducedbyPDGF—BBwasaccessedbycellcountingandmethylthiazolyltet-razoliuin(MTr)．ThemigrationwasassessedbymodifiedBoydenchamberassay．Westernblottingwasusedtodeterminetheexpressionsofthecycle

7、—independentkinaseinhibitorsp27andp21．RESULTS：ProliferationofVSMCsHRin—ducedbyPDGF—BBwasinhibitedaftertransfectionofAd—hKLK1(20—100MOI)inaMOI—dependentmanner．ThepeakinhibitiontiterofAd—hKLK1fellon100MOI，withthepe