小檗碱对肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

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1、小檗碱对肺动脉平滑肌细胞增殖的影响【摘要】目的：观察小檗碱对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的培养大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖的影响。方法：将组织贴块法培养的大鼠PASMCs随机分为对照组，AngⅡ模型组，小檗碱高、中、低剂量组，硝苯地平组和溶剂组。用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法检测各组PASMCs的生长情况，以流式细胞术检测细胞周期构成比和增殖指数(PI)，以乳酸脱氢酶(LDH)法检测小檗碱对细胞的毒性作用。结果：小檗碱可明显降低AngⅡ诱导PASMCs的增殖能力，使PASMC3的G0/G1期构成比显著升高(P<

2、;005)，PI显著下降(P<005)，且对PASMCs释放LDH无影响。结论：小檗碱能抑制AngⅡ诱导的PASMCs增殖，且与细胞毒性作用无关。【关键词】血管紧张素Ⅱ肺动脉平滑肌细胞肺动脉高压小檗碱增殖［Abstract］Objective：Toinvestigatetheeffectofberberineonproliferationofpulmonaryarterysmoothmusclecells(PASMCs)inrats.Methods：PASMCsculturedbytissue_stickingmeth

3、odlydividedintocontrol，model，berberine(105～107?mol/L)，nifedipine，andvehiclegroups.Thecellsproliferationabilitiyinedbymono_nuclearcelldirectcytotoxicityassay.Thecellcycleetry.Results：Berberinesignificantlyinhi_bitedtheproliferationofPASMCs，andup_regulatedsignificantly

4、theconstituentratioofPASMCsG0/G1cellcycle，anddoonaryarterysmoothmusclecell；pulmonaryhypertension；berberine；proliferation肺动脉高压的发病机制尚不十分清楚，目前亦无满意的治疗方法。它的两大基本病理改变是肺血管收缩和肺血管平滑肌构型重建，因此，抑制肺血管收缩，改善肺循环血流动力学以及阻止肺血管平滑肌细胞增殖、增强是治疗其关键［1～3］。钙拮抗剂(硝苯地平等)是近年来临床常用的抗肺动脉高压药物，与在逆转肺动脉高压时血

5、管构型重建方面的机制和抑制细胞内游离Ca2+浓度的增高有关。小檗碱是一种异喹啉生物碱，能抑制小肠黏膜分泌，扩张血管，抗血小板凝集及改善肺缺血再灌损伤等。它也是一种钙拮抗剂，能抑制神经细胞、心肌细胞、平滑肌细胞等细胞内游离Ca2+浓度的增高［1～4］。有报道，平滑肌细胞的增殖与细胞内游离Ca2+浓度的增高有关，且平滑肌细胞的异常分化与增殖是血管重构，肺动脉高压等发生、发展的基础。本实验旨在研究小檗碱对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖的影响。1材料与方法11实验动物SD大鼠［广州第一军医大学动物

6、中心提供］12只，雌雄不拘，体质量200～250?g。12药品及器材小檗碱，硝苯地平(上海第十七制药厂，中国。实验前用DMSO溶解配成)，AngⅡ(Sigma公司，美国)，胎牛血清，M199培养基、胰蛋白酶(Sigma公司，美国)，凯基MTT细胞增殖检测试剂盒以及细胞周期检测试剂盒(凯基生物科技发展有限公司，中国)；乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒(南京建成生物工程研究所，中国)；倒置相差显微镜(上海光学仪器厂，中国)；超净工作台(苏州净化设备有限公司，中国)；CO2培养箱(ThermoForma公司，美国)，multiskan

7、spectrum酶标仪(ThermoLabsystem公司，芬兰)；FACSCalibur流式细胞仪(BectonDickinson公司，美国)。13大鼠PASMCs制备大鼠PASMCs制备见参考17PASMCs细胞周期测定取第3代生长良好的PASMCs，按15分组培养后分别消化，离心，收集细胞于离心管，再用PBS洗涤细胞1次(离心1?000?r/min，10?min)，收集并调整细胞浓度为1×106/mL的细胞悬液，用体积分数70%的冷乙醇固定，4?℃保存。染色前用PBS洗去固定液，加100?μL?RNA酶(50?mg/

8、mL)，37?℃水浴30?min，再加入400?μL碘化丙锭(10?μg/mL)染色混匀，4?℃避光30?min，上机检测。微机处理并分析细胞增殖动力周期中各期细胞数所占总细胞的百分比。并按分裂增殖指数(PI)=(S+G2/M)/(G0/G1+S+G2/M)×1