复发及难治急性髓细胞白血病病人多药耐药基因检测及意义

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1、复发及难治急性髓细胞白血病病人多药耐药基因检测及意义【摘要】目的研究复发及难治急性髓细胞白血病（AML）病人多药耐药基因（mdr1）的表达及其与临床疗效的关系。方法采用逆转录聚合酶链反应（RT?PCR）检测65例AML病人（其中初诊组38例，完全缓解组14例，复发难治组13例）、27例非白血病病人和健康人（包括健康人15例、缺铁性贫血病人10例、特发性血小板减少性紫癜病人2例）mdr1基因的表达水平，并分析其临床意义。结果AML病人mdr1基因表达阳性率高于对照组，复发难治组mdr1基因表达阳性率高于初诊组和完全缓解组，临床耐药组mdr1基因表达阳性率显著高于

2、非临床耐药组，CR率非临床耐药组显著高于临床耐药组，差异均有显著性(χ2=8.334～49.630，P<0.01)。结论mdr1基因阳性表达与AML病人临床耐药密切相关，是影响预后的重要因素，可作为检测临床耐药和判断预后的指标之一。【关键词】白血病髓样多药耐药相关蛋白质类抗药性肿瘤［ABSTRACT］ObjectiveTostudytheexpressionofmultidrugresistancegene(MDRG)andthecurativeeffectinrelapseorrefractoryacutemyelogenousleukemia(AML

3、).MethodsAsemi?quantitativereversetranscriptionpolymerasechainreaction(RT?PCR)anMDRGin65AMLpatientsand27controls,andanalyzetheitsclinicalsignificance.ResultsMDRGexpressionission.Thegeneexpressionission(CR)rateofnon?resistantpatientsultidrugresistanceandprognosis,anditisoneoftheindic

4、atorsforpredictingtheprognosisofAML.［KEYDR）的主要机制。本文应用逆转录聚合酶链反应（RT?PCR）技术检测了65例急性髓细胞白血病（AML）病人、27例非白血病病人和健康人的mdr1基因表达水平，分析mdr1基因表达水平与临床耐药的关系。1材料和方法1.1细胞系与细胞培养K562/A02由中国医学科学院血液学研究所惠赠，用阿霉素（ADM）诱导K562细胞建立的多药耐药细胞株[1]，具有典型的MDR表型。K562/A02细胞在培养过程中加1ng/L的阿霉素，使用前3d撤药。1.2病人及分组根据白血病诊断标准[2]，选择急

5、性髓细胞白血病(AML)病人65例，男39例（年龄18～63岁），女26例（年龄22～59岁），中位年龄34.2岁。其中初诊组（AML?P）38例，完全缓解（CR）组(AML?C)14例，复发难治组(AML?R)13例；M0和M1各1例，M219例，M315例，M414例，M59例，M62例，M71例，杂合型白血病（HAL）3例。对照组27例，其中男16例（年龄19～52岁），女11例（年龄15～46岁），中位年龄30.9岁，包括健康人15例、缺铁性贫血病人10例、特发性血小板减少性紫癜病人2例。15例健康人取外周血，余均取骨髓。病人为青岛大学医学院附属医院及

6、聊城市人民医院住院病人。临床耐药诊断标准：①对一线方案诱导治疗2个疗程无效；②第1次缓解后6个月内复发；③第1次缓解后6个月以上复发经诱导治疗无效；④2次或2次以上复发。1.3半定量RT?PCR细胞总RNA的提取：用TRIzol提取细胞总RNA。经MMLV逆转录酶合成cDNA，以逆转录产物加dNTPs、PCRBuffer、mdr1引物进行PCR，取PCR产物定量10μL扩增产物，25g/L琼脂糖凝胶电泳，灌胶前加EB（1mL1×TAE加1μLEB），75V，30～60min，紫外线灯下观察并照相，用KodakDigitalScience1DImageAnaly

7、sisSoftdr1基因与β?actin的比值。1.4统计学处理应用医学统计学软件SPSS12.0处理，结果用±s表示，数据间比较用F检验及χ2检验。2结果2.1AML病人mdr1基因的表达AML?P组、AML?C组、AML?R组和对照组mdr1基因表达值分别为0.78±0.76、0.54±0.45、1.64±1.75、0.20±0.13，AML病人mdr1基因表达值高于对照组，且AML?R组高于AML?P组、AML?C组，差异有显著性(P<0.001)。见图1。图1mdr1基因表达的RT?PCR检测①Marker；②AML?P；③AML?R；④AML?

8、C；⑤AML?M5；⑥Normal；⑦