癌症高表达蛋白在原发性胆囊癌中的表达及其临床意义

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1、癌症高表达蛋白在原发性胆囊癌中的表达及其临床意义【摘要】目的:探讨原发性胆囊癌(PGC)组织中癌症高表达蛋白(Hec1)的表达与浸润、转移及预后的关系。方法:首先,随机选取PGC患者108例,以慢性胆囊炎患者15例为对照,应用SABC免疫组化方法检测Hec1蛋白的表达。其次,对108例PGC患者中的96例进行术后5年的随访,分析Hec1与PGC患者预后的关联。结果:Hec1蛋白的表达与PGC组织的临床病理学特征及患者的预后均有密切的关系。在发生淋巴道转移及低分化的肿瘤组织中,Hec1蛋白高表达。

2、随着Nevin分级的加重,Hec1蛋白的阳性表达率明显增加(P<0.05)。此外,Hec1蛋白阳性表达的PGC患者的5年生存率明显低于阴性表达的患者(P<0.01)。结论:Hec1蛋白可能与PGC的发生、浸润、转移有关;联合应用Hec1蛋白阳性表达率与其临床病理学分级,有助于正确判断患者的预后。【关键词】Hec1;原发性胆囊癌;临床病理学;预后近年来,随着分子生物学技术的迅速发展,大量研究已证实恶性肿瘤的发生是由于癌基因、生长基因及其受体基因的活化,以及抑癌基因的失活或丢失引起的,研

3、究原发性胆囊癌（primarygallbladdercarcinoma,PGC）相关基因及其蛋白分子不仅对于理解其发病机制十分重要,而且对于发现在诊断和评价预后中有临床意义的分子标记物也同样重要。癌症高表达蛋白（highlyexpressedincancer,Hec1）是利用Rb蛋白C端通过酵母双杂交筛选人B淋巴细胞cDNA文库时发现的,其在肿瘤细胞系中的表达比正常组织和未转化细胞中丰富［1］。Hec1蛋白属于细胞周期蛋白,在终末分化的细胞中不表达,在所有分裂旺盛的细胞中表达量高［2］。关于He

4、c1蛋白的表达与PGC浸润、转移的关系还不清楚。基于以上原因,我们采用免疫组化方法检测108例PGC癌组织中Hec1蛋白的表达情况,探讨其与PGC发生、浸润、转移及预后的关系。1材料和方法1.1材料2000～2002年胆囊癌手术标本108（男61,女47）例;年龄50.1±13.7(32～75)岁。患者术前均未行化放疗。随访时间5～60月。对照组标本15例,为慢性胆囊炎组织。所有标本均经病理证实。鼠抗人Hec1单克隆抗体(mAb)（工作浓度1∶50）和SABC免疫组化试剂盒均为SantaCruz

5、公司生产,购自北京中山生物技术有限公司。1.2方法采用免疫组织化学SABC法,标本经40g/L中性多聚甲醛固定,石蜡包埋,4μm连续切片,70℃烤片15min。切片脱蜡、水化。30mL/LH2O2灭活内源酶,PBS漂洗5min×3次。正常羊血清室温孵育15min。滴加20～30μLPBS稀释的一抗(1∶50的Hec1mAb)4℃过夜。PBS漂洗5min×3次。二抗、三抗依次37℃孵育45min,PBS漂洗5min×3次。DAB显色5～10min,自来水充分洗涤,苏木素复染5min,脱水、透明、

6、封片,镜检。设阳性对照,用PBS替代第一抗体作阴性对照。Hec1蛋白表达阳性为胞核出现棕黄色颗粒。在400×光镜下观察10个视野,每个视野计数100个细胞,阳性细胞计数打分标准如下:<5%细胞Hec1阳性表达记为阴性(0分),5%～25%细胞Hec1阳性表达记为1分,26%～50%细胞Hec1阳性表达记为2分,51%～75%细胞Hec1阳性表达记为3分,>75%细胞Hec1阳性表达记为4分。1.3统计学分析所有数据用SPSS13.0处理,计数资料采用χ2检验。生存分析用Kaplan

7、Meier法。P<0.05表示差异具有统计学意义。2结果2.1Hec1蛋白表达与PG-C临床病理特征的关系免疫组织化学染色结果显示,Hec1蛋白在PGC组织中的阳性表达率为78.70%（85/108）,而在慢性胆囊炎组织中的阳性表达率仅为6.67%（1/15）,差异具有统计学意义(P<0.05)。经统计学分析可知,Hec1蛋白的表达与PGC组织的临床病理学特征有密切的关系(表1)。Hec1蛋白在发生淋巴道转移及低分化的肿瘤组织中,阳性表达率高于无淋巴道转移及高中分化的肿瘤组织（P&l

8、t;0.05）,强阳性表达率也随之升高。此外,NevinI～III级的PGC组织中Hec1蛋白的阳性表达率明显高于NevinIV～V级的PGC组织(P<0.05)。表1Hec1蛋白表达与PGC临床病理特征的关系3讨论PGC在胆道肿瘤中恶性程度很高,早期并无特殊症状,有明显症状就诊的患者多已属进展期,根治性切除率低,术后生存期短［3］。目前,已发现恶性肿瘤浸润转移过程极为复杂,包括肿瘤细胞的脱落、在基质中的移动、进出血管或淋巴管及在远处部位的增殖等多个步骤,涉及多种细胞因子［4,5］。而从基