jnk在惊厥持续状态幼年大鼠海马中的表达及依达拉奉对其的影响

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1、JNK在惊厥持续状态幼年大鼠海马中的表达及依达拉奉对其的影响：陆海燕，邓小龙，李光乾，李伟【摘要】目的：研究(JNK)在惊厥持续状态(SC)幼年大鼠海马中的表达及依达拉奉对其的影响。方法：雄性SD幼年大鼠120只分为正常对照组(NC组)、惊厥持续状态组(SC组)、依达拉奉组(EDA组)三大组;各大组均随机分为5组，分别于惊厥后4、12、24、48和72h处死。采用氯化锂-匹鲁卡品法制作惊厥持续状态模型。EDA组在大鼠造模前三天予EDA腹腔注射，每天注射一次，连续3d。TUNEL法检测观察大鼠海马细胞凋亡情况;免疫组化法检测海马p-JNK蛋白表达动态变

2、化;RT-PCR技术检测海马JNK1mRNA表达的动态变化。结果：SC组在惊厥12h后的各时间点海马CA1区TUNEL阳性细胞数均显著高于NC组(P<0.01)，而ED组TUNEL阳性细胞数均较SC组显著下降(P<0.01或P<0.05)。幼年大鼠海马CA1区p-JNK蛋白在SC组表达显著增强，与NC组比较差异有显著性(P<0.01)，在EDA组表达较SC组明显下降(P<0.01)。SC组海马JNK1mRNA表达明显高于NC组(P<0.01)，而在EDA组JNK1mRNA的表达较SC组显著降低(P<0.01)

3、。结论：SC可诱导JNK的表达，促进SC后海马神经元凋亡;EDA预处理可以影响JNK的表达，减轻惊厥后海马神经元凋亡程度。【关键词】惊厥;脑损伤;幼年大鼠;JNK;依达拉奉　　Abstract:Objective:ToobservethechangeofJNKinthehippocampusofstatusconvulsiveratandtheregulationeffectofEDAonit.Methods:OnehundredandtaleJuvenileSprague-Dalydividedintonormalcontrolgroup(NC)，

4、statusconvulsivusgroup(SC)，andedaravonegroup(EDA);andeverygrouplydividedintofivegroups，ChlorideandPilocarpine.GroupEDAediateddUTPnickendlabeling(TUNEL)，thechangesofp-JNKproteininthehippocampusCA1domainsmunohistochemistry(IHC)，theexpressionofJNK1mRNApusCA1ofSCgrouporethanthatofN

5、Cgroupat12haftertheSC(P<0.01).Aftertheinterventionofedaravone，TUNELpositivecellsshopusCA1domainsincreasedmarkedlyinSCgroup.ThedifferenceuchloRNAinthehippocampusinSCGroupuchhigherthanNCGroup(P<0.01)，andEDAgroupaybeincreasetheexpressionofJNK，JNKmaybemediatedtocellapoptosis.

6、EDAcaneffecttheexpressionofJNK，andlessenthepothologyofhippocampus.　　KeyRNA表达的变化，及依达拉奉对SC后海马JNK表达及神经元凋亡情况的影响，初步探讨JNK与惊厥性脑损伤的关系及依达拉奉在SC幼鼠中可能的神经元保护机制。　　1材料和方法　　1.1实验动物和试剂清洁级健康幼年雄性Sprague-Dain，惊厥解除后状态良好的大鼠为合格SC大鼠模型。NC组：不作任何处理。EDA组：造模前3d予EDA3mg/kg腹腔注射，每天注射一次，连续3d，其余用药同SC组。　　1.3动物标本的

7、制备大鼠分别于惊厥后各时间点处死。经10%水合氯醛(350mg/kg)腹腔麻醉后，断头剥离颅骨，完整取出脑组织置于冰盘上，分离右侧海马脑组织，放入去RNA酶的EP管中，迅速置于液氮中保存。左侧大脑在垂直视交叉处离断，并冠状位向后切取约5mm，放入预冷的4%多聚甲醛固定12h，入70%乙醇，送病理科进行石蜡包埋;石蜡包埋后制片，切片厚度为5μm。　　1.4实验方法　　1.4.1TUNEL检测凋亡细胞：具体操作步骤参照试剂盒说明书。二氨基联苯胺(DAB)显色，中性树脂封片。结果判定：细胞核中有棕黄色颗粒者为阳性细胞，即凋亡的细胞;光镜下每组各选阳性细胞最

8、集中的5个高倍视野，计算出每个高倍视野的阳性细胞数，取其平均值。　　1.4.2免疫组织化学检测p-JNK蛋白