jnk在惊厥持续状态幼年大鼠海马中的表达及依达拉奉对其的影响论文

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1、JNK在惊厥持续状态幼年大鼠海马中的表达及依达拉奉对其的影响论文陆海燕，邓小龙，李光乾，李伟【摘要】目的：研究(JNK)在惊厥持续状态(SC)幼年大鼠海马中的表达及依达拉奉对其的影响。方法：雄性SD幼年大鼠120只分为正常对照组(NC组)、惊厥持续状态组(SC组)、依达拉奉组(EDA组)三大组;各大组均随机分为5组，分别于惊厥后4、12、24、48和72h处死。采用氯化锂-匹鲁卡品法制作惊厥持续状态模型。EDA组在大鼠造模前三天予EDA腹腔注射，每天注射一次，连续3d。TUNEL法检测观察大鼠海马细胞凋亡情况;免疫组化法检测海马p-JNK蛋白表达动

2、态变化;RT-PCR技术检测海马JNK1mRNA表达的动态变化。结果：SC组在惊厥12h后的各时间点海马CA1区TUNEL阳性细胞数均显著高于NC组(P0.01)，而ED组TUNEL阳性细胞数均较SC组显著下降(P0.01或P0.05)。幼年大鼠海马CA1区p-JNK蛋白在SC组表达显著增强.freelRNA表达明显高于NC组(P0.01)，而在EDA组JNK1mRNA的表达较SC组显著降低(P0.01)。结论：SC可诱导JNK的表达，促进SC后海马神经元凋亡;EDA预处理可以影响JNK的表达，减轻惊厥后海马神经元凋亡程度。【关键词】惊厥;脑损伤;

3、幼年大鼠;JNK;依达拉奉Abstract:Objective:ToobservethechangeofJNKinthehippocampusofstatusconvulsiveratandtheregulationeffectofEDAonit.Methods:OnehundredandtaleJuvenileSprague-Dalydividedintonormalcontrolgroup(NC)，statusconvulsivusgroup(SC)，andedaravonegroup(EDA);andeverygrouplydividedin

4、tofivegroups，ChlorideandPilocarpine.GroupEDAediateddUTPnickendlabeling(TUNEL)，thechangesofp-JNKproteininthehippocampusCA1domainsmunohistochemistry(IHC)，theexpressionofJNK1mRNApusCA1ofSCgrouporethanthatofNCgroupat12haftertheSC(P0.01).Aftertheinterventionofedaravone，TUNELpositiv

5、ecellsshopusCA1domainsincreasedmarkedlyinSCgroup.ThedifferenceuchloRNAinthehippocampusinSCGroupuchhigherthanNCGroup(P0.01)，andEDAgroupaybeincreasetheexpressionofJNK，JNKmaybemediatedtocellapoptosis.EDAcaneffecttheexpressionofJNK，andlessenthepothologyofhippocampus.KeyRNA表达的变化，及依

6、达拉奉对SC后海马JNK表达及神经元凋亡情况的影响，初步探讨JNK与惊厥性脑损伤的关系及依达拉奉在SC幼鼠中可能的神经元保护机制。1材料和方法1.1实验动物和试剂清洁级健康幼年雄性Sprague-Dain，惊厥解除后状态良好的大鼠为合格SC大鼠模型。NC组：不作任何处理。EDA组：造模前3d予EDA3mg/kg腹腔注射，每天注射一次，连续3d，其余用药同SC组。1.3动物标本的制备大鼠分别于惊厥后各时间点处死。经10%水合氯醛(350mg/kg)腹腔麻醉后，断头剥离颅骨，完整取出脑组织置于冰盘上，分离右侧海马脑组织，放入去RNA酶的EP管中，迅速置

7、于液氮中保存。左侧大脑在垂直视交叉处离断，并冠状位向后切取约5mm，放入预冷的4%多聚甲醛固定12h，入70%乙醇，送病理科进行石蜡包埋;石蜡包埋后制片，切片厚度为5μm。1.4实验方法1.4.1TUNEL检测凋亡细胞：具体操作步骤参照试剂盒说明书。二氨基联苯胺(DAB)显色，中性树脂封片。结果判定：细胞核中有棕黄色颗粒者为阳性细胞，即凋亡的细胞;光镜下每组各选阳性细胞最集中的5个高倍视野，计算出每个高倍视野的阳性细胞数，取其平均值。1.4.2免疫组织化学检测p-JNK蛋白表达：石蜡切片融蜡水化后，用EDTA进行抗原修复，滴加50μL鼠抗p-JNK

8、抗体(1:100)4℃过夜后滴加二抗，DAB显色，中性树脂封片。显微镜下观察，阳性细胞为胞核中出现棕黄色。每张切片随机选择