肝癌组织高迁移率族蛋白b1（hmgb1）的表达及其与临床病理因素的关系

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1、肝癌组织高迁移率族蛋白B1（HMGB1）的表达及其与临床病理因素的关系关键词：肝细胞癌；HMGB1；免疫组织化学；计算机图像分析高迁移率族蛋白B1（high-mobilitygroupbox-B1,HMGB1）是高度保守的非组蛋白DNA结合蛋白，哺乳动物中HMGB1具有99%的同源性质，HMGB1作为一种核蛋白，在DNA结构、基因转录、重组、细胞存活等方面发挥重要的调控作用[1,2]。最新研究发现HMGB1与原发性肝细胞癌有关，由于其在原发性肝细胞癌中的表达特异性升高而引起研究者[3-5]的注意。因此，我们采用免疫组织化学

2、及计算机图像分析技术方法分析HMGB1蛋白在原发性肝细胞癌中的表达及与其临床病理因素的关系，为进一步探讨HMGB1与原发性肝细胞癌的发生、发展，浸润、转移的关系，寻找新的生物学标记物及治疗靶点奠定基础。材料与方法一、一般资料材料：标本来自2008年1月-2011年3月昆明市第一人民医院肝胆外科的原发性肝癌患者，以距癌灶边缘5cm为分界分别留取肝癌癌灶组织，非癌组织各30例。其中男24例，女6例，年龄36-75岁，平均年龄59.6±10.5岁。瘤体＜5cm16例，瘤体≥5cm14例，所有标本均经病理组织学证实为原发性肝细胞肝

3、癌。二、方法1.免疫组织化学法兔抗人HMGB1多克隆抗体及S-P免疫组化试剂盒分别购自美国PTG公司，北京中杉金桥生物技术有限公司。肝癌及癌旁组织免疫组化以经典的S-P法进行（HMGB1工作浓度1：100，每片滴加HMGB1一抗，4℃冰箱过夜）DAB显色，以PBS液代替一抗作为阴性对照，以已证实HMGB1染色阳性的肝癌标本作阳性对照。　　　2.计算机图像分析应用HPIAS—1000高清晰度病理图文分析系统对免疫组化结果进行定量分析。（详细操作步骤参照HPIAS—1000型图像分析仪使用手册。）3.结果判断：（1）免疫组化细

4、胞核和/或细胞浆出现棕黄色或棕褐色染色颗粒为阳性细胞。每张切片在高倍镜下（X200）随机观察5个视野，计数200个细胞/视野，阳性细胞数＜15%为表达阴性（-），阳性细胞数15%-50%为表达弱阳性（+），阳性细胞数51%-75%为表达中等强度阳性（++），阳性细胞数＞75%为表达强阳性（+++），其中阳性细胞数大于50%为过表达。（2）计算机图像分析每组标本均在400×放大倍数下按照无偏采样原则取5个视野，每个视野均按照无偏采样原则取5个细胞进行测定。根据阳性单位（PU）结果来判断免疫组化染色强度的差异。PU值用均值+标

5、准差（）表示。4统计学分析应用SPSS13.0统计软件分析处理。多样本和两样本半定量积分的阳性表达比较均采用Kruskal-GB1蛋白表达较低，表现为少数胞核和（或）胞浆微弱着色。HMGB1蛋白在肝癌组织中呈过表达，阳性颗粒主要位于细胞核中，细胞浆也有微弱着色（图1～4）。肝细胞癌组织中HMGB1阳性表达率为80%，与癌旁组织30%相比，差异有统计学意义（P＜0.05）。肝细胞癌组织Ⅰ、Ⅱ-Ⅲ、Ⅳ级中HMGB1蛋白阳性表达率逐渐增加，分别为62.5%、83%、90%，（均P＜0.05）。随着肝细胞癌淋巴结的转移，HMGB1

6、蛋白的阳性表达率增加，分别为76.2%、89%，包膜不完整肿瘤的HMGB1阳性率（81.8%）高于包膜完整者（78.9%），其差异均有统计学意义（P＜0.05）。而HMGB1蛋白与肝细胞癌患者年龄、性别及肿瘤大小无关（均P＞0.05）。计算机图像分析结果与免疫组化结果一致（详见表1～2）。　　　中呈阳性表达×100中呈阳性表达×4002．计算机图像分析结果表1HMGB1与肝细胞癌及癌旁组织的关系表2HMGB1与原发性肝细胞性肝癌临床病理因素的关系组别例数阳性单位（PU）（）P值性别　　男2513.67±0.350.517　

7、　女511.11±1.08年龄/岁＜5069.83±0.960.180　≥502414.30±0.10肿瘤大小/cm＜51612.17±0.430.432≥51414.47±1.23肿瘤包膜完整1911.13±0.590.041不完整1116.89±8.80Edmondson分级Ⅰ级（高分化）86.57±0.450.041Ⅱ-Ⅲ级（中分化）1212.51±0.180.001Ⅳ级（低分化）1018.95±1.120.034淋巴结转移　　无2110.99±0.010.014　　有918.48±1.23迄今为止，研究发现[9,1

8、0]多种肿瘤组织和患者血清中均有HMGB1的高表达（如结直肠癌、乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、黑色素瘤、头颈部鳞癌、膀胱癌、宫颈癌），且其配体RAGE在不同的肿瘤细胞中也有表达。给予HMGB1或RAGE抑制剂，可以明显抑制肿瘤细胞增殖[13]。HMGB1并与肿瘤分期、浸润深度、淋巴结转移、肿瘤大小及预后明显