p57kip2在肝癌组织中的表达及其与临床病理因素、pcna和p53的关系

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1、p57kip2在肝癌组织中的表达及其与临床病理因素、PCNA和p53的关系　　【Abstract】AIM:Toinvestigatetheexpressionofp57kip2anditsrelationshiparyhepatocellularcarcinoma(HCC).METHODS:Expressionofp57kip2,PAandp53intumortissuesfrom32patientsalpersonsmunohistochemicaltechnique.RESULTS:p57kip2prot

2、einpositiveexpressionrateinHCCaltissues(100%)(P=0.011).Thereducedexpressionofp57kip2proteincorrelatedsignificantlyoderateorloorcells(P=0.007),highclinicalstage(P=0.041)andpoorprognosis(P=0.036),butdidnotcorrelatesignificantlyetastasis,tumorsize,levelofAFPan

3、dage(P>0.05).PApositiveexpressionratearkedlossorabsenceofp57kip2expressionandhighexpressionofPAinHCC,entofHCC.p57kip2andp53mayinduceapoptosisviadifferentmechanisms.　　【Key切片，应用多聚赖氨酸包被，用作免疫组化研究.对所有蜡块HE染色观察，选出组织学形态较好的切片进行研究.收集同时期意外死亡健康成年男性正常肝脏组织标本10例，经HE染色诊

4、断为正常肝组织，作为对照组.　　1.1.2试剂抗鼠抗人p57kip2mAb（57P06），抗鼠抗人PAmAb（PC10），抗鼠抗人p53抗体（MAB0226），Elivision二步法检测试剂盒购自福州迈新生物技术开发公司.　　1．2方法　　1.2.1p57kip2，PA，p53应用免疫组化(Elivision法)染色切片常规脱蜡至水，30mL/L双氧水阻断内源性过氧化物酶20min，将切片至于pH6.0的柠檬酸缓冲液行高温高压抗原热修复7min，置冷，羊血清封闭37℃孵育20min.加p57kip2一抗（1

5、∶50），置于湿盒，4℃冰箱过夜.PA和p53一抗均按1∶50稀释，置37℃恒温箱孵育1h.先后加Elivision二步法检测试剂盒中试剂A、B各50μL，分别室温孵育40min.DAB显色，苏木素衬染，盐酸乙醇分化，脱水透明后中性树胶封固.光学显微镜下观察结果.以正常肝组织作p57kip2和p53的阳性对照，以磷酸缓冲盐溶液(PBS)代替一抗作阴性对照.以正常肝组织作PA的阴性对照.　　1.2.2结果判定p57kip2蛋白以胞核或胞质染色为棕黄色颗粒为阳性.阳性细胞百分比为计400倍显微镜下10个视野阳性细

6、胞的平均数：0，<10%；1，10%~25%；2，25%~50%；3，50%~75%;4，>75%.阳性强度以着色程度进行计分:0，不着色；1，淡黄；2，棕黄；3，棕褐.两分相乘:0~2为阴性，3~5为弱阳性，6~8为阳性，9~12为强阳性.PA及p53以胞核染色为棕黄色颗粒>50%为阳性细胞.　　统计学处理：所得数据应用SPSS11.0统计软件包处理.采用Fisher确切概率法及Spearman相关分析.P<0.05认为有统计学意义.　　2结果　　2.1p57kip2的表达在32例原

7、发性肝癌(HCC)组织中，p57kip2阳性表达18例，表达率56.25%，所有正常肝组织均为阳性表达（Fig1），表达率为100%，肝癌组织p57kip2的表达率显著低于正常组织（P=0.011）.表达p57kip2的高分化肝癌组织中，胞质和胞核呈棕黄色颗粒(Fig2).p57kip2在低分化肝癌组织中，与周围阳性癌旁组织相比，癌灶阳性细胞着色浅，数量少，细胞排列不一，形态紊乱(Fig3).　　2.2p57kip2表达与肝癌的病理分级、临床分期、及生存期等的关系p57kip2表达与肝癌的病理分级、临床分期、

8、及生存期有关，与年龄、AFP,最大瘤径及肝被膜转移和局部侵犯无关.32例分化程度不同的肝癌标本中，癌细胞分化越差，p57kip2蛋白的表达率越低.p57kip2蛋白在Ⅰ~Ⅱ级的阳性率（88.2%）显著Ⅲ~Ⅳ级阳性率（20.0%,P=0.007）.p57kip2蛋白表达在早期HCC患者（72.2%）及生存期≥1a的患者（78.6%）显著高于晚期HCC患者（35.7%,P=0.041）及生存期＜1a患者