htert启动子驱动的trail联合放化疗对hela裸鼠移植瘤生长抑制的作用

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1、hTERT启动子驱动的TRAIL联合放化疗对HeLa裸鼠移植瘤生长抑制的作用　　【Abstract】AIM:TostudytheinhibitoryeffectofhTERTpromoterregulatedTRALLbinedoradiotherapyonthegroorofHeLacellsinnudemice.METHODS:TheTRAILgeneactivatedbythehTERTpromoterinedbyimmunohistochemicalstaining;Theratsotherapygroup,radiotherapygro

2、up,binedtreatmentgroup(geransfection+chemoradiotherapy),andcontrolgroup,icesubcutaneously.ThebindedeffectsofTRAILoradiotherapyonthenodulationofthecervicalcancerHeLalinesororgroined.RESULTS:GFP/TRAILexpressionratee(P>0.05).ThetransplantedtumororsinhTERTTRAILgreorgroothera

3、pygroupatorinnudemice.Thegenetransfectionplusradiochemotherapymayenlightenthefuturepreclinicalstudyandclinicaltherapyfortumors.　　【Keys;tumornecrosisfactorrelatedapoptosisinducingligand(TRAIL);telomerase;promoterregions(geics);cisplatin;neoplasmtransplantation;mice,nude;apop

4、tosis　　【摘要】　目的：探讨hTERT启动子驱动的TRAIL联合放化疗对宫颈癌HeLa裸鼠皮下移植瘤生长抑制的作用.方法：将含有hTERT启动子的TRAIL基因载体转染宫颈癌细胞HeLa，检测稳定转染细胞中GFP/TRAIL的表达；实验裸鼠分为基因组，化疗组，放疗组，综合组（基因+放化疗），对照组，每组5只，未转染HeLa组为对照组,不作任何处理；将稳定转染基因载体及未转染的HeLa细胞种植于裸鼠背部皮下，联合放化疗，来观察移植瘤成瘤情况，移植瘤的体积、质量以及质量抑制率的变化.结果：转染hTERTTRAIL细胞中GFP/TRAIL(绿色荧

5、光蛋白)表达率高于对照组，有统计学意义(P<0.01)；各组裸鼠在接种细胞第5~7日全部长出肿瘤小结节，结节出现的时间差异无统计学意义(P>0.05)；转染hTERTTRAIL细胞与对照组HeLa细胞裸鼠的移植瘤质量相比差异有统计学意义(P<0.05);hTERTTRAIL细胞在裸鼠体内所形成的移植瘤生长较慢,4ornecrosisfactorrelatedapoptosisinducedligand,TRAIL)具有选择性杀伤肿瘤细胞的作用，其抗肿瘤的优点已受到研究者的广泛重视［2］.本实验旨在探讨端粒酶(hTERT)启

6、动子驱动的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对HeLa裸鼠宫颈癌移植瘤的抑制作用，以及与化放疗的协同作用.　　1材料和方法　　1.1材料宫颈癌细胞株HeLa由第四军医大学西京医院妇产科实验室提供，体外培养传代.质粒hTERTpromoterpIRES2EGFP由李红梅博士惠赠.Lipofectamine2000脂质体转染试剂盒、G418购自Invitrogen公司.胎牛血清购自杭州四季青公司，DMEM购自Gibco公司.cDDP为齐鲁制药厂产品.BALB/C裸鼠5~6L/L胎牛血清的DMEM于37℃，50mL/LCO2孵箱中培养传代，倒置显微镜下观察

7、细胞生长状况，于对数生长期时收集细胞，以5×105细胞/孔接种于6孔板，过夜培养.待细胞长满至80%~85%板面积时，分别以hTERTpromoterpIRES2EGFPTRAIL载体,HeLa细胞，具体操作按Lipofectamine2000试剂盒说明书进行，同时以未转染的HeLa细胞为阴性对照.转染48h后，以含800g/LG418的选择培养液进行筛选.　　1.2.2转染hTERTpromoterpIRES2EGFPTRAIL细胞的免疫荧光表达G418筛选后的抗性克隆扩大培养，2.5g/L胰酶消化，制备细胞爬片，以950mL/L乙醇

8、固定20min，0.01moL/LPBS振洗5min，免疫荧光染色采用间接免疫荧光法检测GFP/TRAIL的表达.TRAI