htert启动子驱动的trail联合放化疗对hela裸鼠移植瘤生长抑制的作用论文

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1、hTERT启动子驱动的TRAIL联合放化疗对HeLa裸鼠移植瘤生长抑制的作用论文张明辛晓燕李红梅宋辉【Abstract】AIM:TostudytheinhibitoryeffectofhTERTpromoterregulatedTRALLbinedoradiotherapyonthegroorofHeLacellsinnudemice.METHODS:TheTRAILgeneactivatedbythehTERTpromoterinedbyimmunohistochemicalstaining;Theratsothe

2、rapygroup,radiotherapygroup,binedtreatmentgroup(geransfection+chemoradiotherapy),andcontrolgroup,icesubcutaneously.ThebindedeffectsofTRAILoradiotherapyonthenodulationofthecervicalcancerHeLalinesororgroined.RESULTS:GFP/TRAILexpressionratee(P0.05).Thetransplante

3、dtumororsinhTERTTRAILgreorgrootherapygroupatorinnudemice.Thegenetransfectionplusradiochemotherapymayenlightenthefuturepreclinicalstudyandclinicaltherapyfortumors.【Keys;tumornecrosisfactorrelatedapoptosisinducingligand(TRAIL);telomerase;promoterregions(geics)

4、;cisplatin;neoplasmtransplantation;mice,nude;apoptosis【摘要】目的：探讨hTERT启动子驱动的TRAIL联合放化疗对宫颈癌HeLa裸鼠皮下移植瘤生长抑制的作用.方法：将含有hTERT启动子的TRAIL基因载体转染宫颈癌细胞HeLa，检测稳定转染细胞中GFP/TRAIL的表达；实验裸鼠分为基因组，化疗组，放疗组，综合组（基因+放化疗），对照组，每组5只，未转染HeLa组为对照组,不作任何处理；将稳定转染基因载体及未转染的HeLa细胞种植于裸鼠背部皮下.freelorn

5、ecrosisfactorrelatedapoptosisinducedligand,.freeloterpIRES2EGFP由李红梅博士惠赠.Lipofectamine2000脂质体转染试剂盒、G418购自Invitrogen公司.胎牛血清购自杭州四季青公司，DMEM购自Gibco公司.cDDP为齐鲁制药厂产品.BALB/C裸鼠5~6L/L胎牛血清的DMEM于37℃，50mL/LCO2孵箱中培养传代，倒置显微镜下观察细胞生长状况，于对数生长期时收集细胞，以5×105细胞/孔接种于6孔板，过夜培养.待细胞长满至

6、80%~85%板面积时，分别以hTERTpromoterpIRES2EGFPTRAIL载体,HeLa细胞，具体操作按Lipofectamine2000试剂盒说明书进行，同时以未转染的HeLa细胞为阴性对照.转染48h后，以含800g/LG418的选择培养液进行筛选.1.2.2转染hTERTpromoterpIRES2EGFPTRAIL细胞的免疫荧光表达G418筛选后的抗性克隆扩大培养，2.5g/L胰酶消化，制备细胞爬片，以950mL/L乙醇固定20min，0.01moL/LPBS振洗5min，免疫荧光染色采

7、用间接免疫荧光法检测GFP/TRAIL的表达.TRAILmAb（1∶400）,37℃孵育1h,FITC标记兔抗小鼠IgG37℃45min,各步骤间用PBS(pH7.4)充分漂洗,磷酸甘油封片,于MRC1024型激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)观察摄片（激发波长为488nm，共聚焦系统由BioRad公司提供的软件控制），转染3次细胞,利用软件在镜下随机选取5个细胞，对其进行定量分析，取平均值.1.2.3接种细胞和动物分组1.2.3.1分组每组5只,对照组命名HeLa1，腹腔注射PBS0.2mL；实验组：命名HeLa

8、T基因组，腹腔注射PBS0.2mL；命名HeLaC为化疗组，腹腔注射DDP，剂量为3mg/kg；命名HeLaR放疗组，腹腔注射PBS0.2mL，放疗剂量2Gy;命名HeLaRC为联合组，放疗剂量2Gy，放疗前30min腹腔注射cDDP3mg/kg,放疗2次.1.2.3.2接种细胞取对数生长期的转染hTERTTRAIL细胞