二苯乙烯苷对aβ2535致ng10815损伤的保护作用

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1、二苯乙烯苷对Aβ2535致NG10815损伤的保护作用：黄忠仕，农嵩，谢海渊，张树球，李韬，李曙波【摘要】　　目的观察二苯乙烯苷对Aβ2535诱导损伤的NG10815细胞生长、分化的影响。方法以Aβ2535诱导NG10815细胞建立痴呆细胞模型后加入二苯乙烯苷培养，观察NG10815细胞的生长状态、存活率、突起率及突起平均长度。结果与细胞模型组相比，二苯乙烯苷组能在一定程度上抑制Aβ2535对痴呆细胞的损伤作用，细胞生长状态良好，细胞存活率、突起率及突起平均长度与模型组比较均有显著性差异（P＜0.05或

2、P＜0.01）。结论二苯乙烯苷对Aβ2535诱导的NG10815细胞损伤具有保护作用。【关键词】二苯乙烯苷老年性痴呆β淀粉样蛋白NG10815细胞　　【Abstract】ObjectiveToobservetheeffectsofTSGonthegroodelofAlzheimer'sdisease(AD)andthenAβ2535damage.paredodelgroup,themorphology,survivalrate,neuriteoutgroTSGgroup(P＜0.05orP＜0.01).Concl

3、usionTSGcanprotecttheNG10815cellularinjuryinducedbyAβ2535.　　【Keyer'sdisease(AD);βAmyloidprotein;NG10815cells　　二苯乙烯苷（2，3，5，4’四羟基二苯乙烯βD葡萄糖苷，TSG）是何首乌中的主要水溶性成分。近年来发现二苯乙烯苷对神经具有保护作用，其作用机制可能通过钙通道拮抗、抗氧化、胆碱脂酶抑制剂、调节细胞凋亡等途径而起作用的，因此对老年性痴呆（Alzheimer’sdisease,AD）等神经退

4、行性病变的防治具有很好的应用价值，可开发研制为治疗老年性痴呆的新药物［1～3］。本实验以Aβ2535诱导NG10815细胞建立痴呆细胞模型，并观察二苯乙烯苷对该模型的影响，现报道如下。　　材料和方法　　1.实验材料　　①实验细胞株：NG10815细胞由广西中医学院钟振国教授惠赠。②试剂与仪器：主要试剂有二苯乙烯苷（由本教研室根据有关文献［4］提取）；Aβ2535片段，cAMP，PenicillinG，硫酸链霉素，MTT（以上试剂由Sigma公司提供）；HAT（次黄嘌呤/胸腺嘧啶核苷/氨甲喋呤）（Gibco公司提

5、供）；胎牛血清（FBS），DMEM培养基（Hyclone公司提供）。主要仪器为CO2培养箱（ThermoForma公司）；倒置显微镜（南京江南光电股份有限公司）；酶标仪（Metertech公司）。　　2.培养方法　　将细胞培养分为三组，①正常对照组：以5ûS培养，不加Aβ2535；②模型组：以5ûS培养，加Aβ2535；③TSG组：以5ûS培养，加TSG（25、50、100μmol/L）+Aβ2535。细胞增殖培养时，将NG10815细胞加入细胞增殖液（5ûS+D

6、MEM+1%HAT+1%双抗）悬浮细胞，离心，去上清液，分装至50ml培养瓶，10%CO2、37℃培养。待细胞基本长满后，用细胞增殖液将细胞数稀释至约3万/ml，传到96孔培养板，每孔150μl。继续培养1天后，去掉原培养液，更新增殖液，同时模型组、TSG组每孔加入Aβ2535至终浓度为5μΜ，继续培养48小时。将上述在50ml培养瓶中长满的NG10815细胞用细胞分化液（5ûS+1%HAT+1%双抗+1mMcAMP+DMEM）稀释至约3万/ml，按每孔150μl传到96孔培养板培养。分化液培养，同时模

7、型组、TSG组每孔加入Aβ2535至终浓度为5μΜ，继续培养48小时。　　3.观察指标　　①细胞形态学观察：每天用倒置显微镜对96孔培养板上各组细胞进行观察及拍照。②增殖或分化细胞存活率的检测：用MTT法对增殖或分化培养48小时后的细胞进行检测，可分别得到与以上两类细胞存活率相对应的OD值。吸弃待测细胞培养孔内培养液，加无血清DMEM液100μl/孔，MTT液20μl，于37℃、10%CO2条件下4小时，出现兰色结晶后，加SDSDMF100μl/孔，于37℃、10%CO2条件下过夜，用酶标仪于λ=570nm测OD值

8、。③分化细胞突起率及其平均长度：置分化培养48小时后的分化细胞于倒置显微镜下，在培养板每孔上下左右中5个视野各拍片一张，然后在照片上测量轴突的长度和计算突起细胞的百分比，当细胞突起长度超过细胞的直径时为突起阳性细胞。　　4.统计学方法　　所有检测结果以均数±标准差（-±s）表示，采用SPSS11.0统计软件分析，组间均数比较采用