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1、灯盏花提取成分对持续性高眼压大鼠视网膜基因表达的影响【关键词】视网膜持续性高眼压基因表达凋亡灯盏花[Abstract]ObjectiveToobservetheintraocularpressureandthegeneexpressionofretinaoftheratmodelofchronic,moderatelyelevatedintraocularpressure(IOP)byDSXdraHerbaErigerontis.Methods(1)BythemethodofAkira,theratmodelofchronic
2、,moderatelyelevatedintraocularpressureonitoredtheintraocularpressurecontinuouslyfor3dayandmadeOligogenearray.Results(1)TheaverageIOPmHgbeforeoperationanditelevated147%afteroperation.Onemonthlater,TheaverageIOPofmodelgroupesthanpreoperation.TheaverageIOPoftestgroupea
3、spreoperation.ConclusionDSXcouldprotecttheretinaoftheratmodelofchronic,moderatelyelevatedintraocularpressure.[Keyoderatelyelevatedintraocularpressure;geneexpression;apoptosis;HerbaErigerontis青光眼(glaua)是指与眼压升高有关的以视网膜神经纤维萎缩、视盘凹陷和视野缺损为主要特征的一组疾病,为临床常见的继白内障之后的第二位致盲性眼病。灯盏
4、花提取成分(DSX)是从中药灯盏花中提取的有效成分。目前已证明灯盏花具有活血化瘀、通窍明目的作用,能保护高眼压状态下的RGCs免受或少受损伤并挽救凋亡细胞[1],在此基础上,我们进行了进一步的研究,现总结资料如下。1材料与方法1.1实验动物8~12周龄SD大鼠,体重约150~200g。均符合一级动物标准。饲料为全价鼠颗粒饲料。SD大鼠及饲料均由成都中医药大学实验动物中心提供(生产合格证:川实动管质第99-11号)。饲养室温10℃~15℃,相对湿度55%~75%,12h光照维持,自由摄食饮水。纳入标准:(1)无外眼部疾病。(2)
5、双眼瞳孔直接对光反射和间接对光反射正常。1.2主要试剂戊巴比妥钠(上海化学试剂厂分装)、1%地卡因(成都中医药大学附属医院制剂室)、0.25%氯霉素眼液(长春迪瑞制药有限公司)、RNAlater(QIAGEN公司)、EDTA-Na2(国药集团化学试剂有限公司)NucleoSpinRNAclean-up试剂盒(MACHEREY-NAGEL,Germany)等。DSX由中药灯盏花提取制成。1.3主要仪器电子秤(上海天平仪器厂)、电子天平(上海天平仪器厂)、眼科显微手术器械(苏州医疗器械厂)、眼科手术显微镜(苏州医疗器械设备厂)、
6、TONO-PEN笔式眼压计(美国Medtronicsolan公司)、眼科手术止血器(大连山木医疗器械厂)、大鼠Oligo芯片、LuxScan10KA双通道激光扫描仪(CapitalBio公司)等。1.4方法1.4.1动物分组动物购回后,适应性驯养3天,每天连续测量眼压,剔除平均眼压高于或低于正常眼压区间的大鼠,其余随机分为空白组、模型组和实验组3个组。空白组不造模,模型组和实验组右眼单眼造模。模型组于术后第4天开始每日用生理盐水3ml灌胃1次,实验组用DSX3ml,所有大鼠均于1个月后处死。1.4.2造模方法采用Akira法[
7、2],烙闭SD大鼠右眼3支上巩膜静脉。1.4.3眼压测量及芯片制作(1)眼压测量:实验中所有眼压测量均在同一时间(9am~2pm)进行,连续测量的术前眼压的平均值作为正常眼压;术后即刻、术后1天、术后每7天各测1次眼压,共1个月。(2)芯片制作:大鼠脱颈处死,立即摘除眼球,从角巩膜缘切开眼球,剥离视网膜,提取totalRNA,再经纯化、荧光标记、杂交等过程制作成Oligo芯片,用LuxScan10KA双通道激光扫描仪进行扫描。1.4.4统计学方法采用SPSS14.0forWindows统计软件。自身左右眼及前后比较用配对t检验
8、,多组间两两比较用单因素方差分析(LSD法)。差异基因的挑选采用t-test。2结果2.1动物造模结果SD大鼠40只,经连续测量3天眼压,剔除眼压不合格的大鼠1只,其余39只随机分出空白组9只,其余SD大鼠进行造模。造模时麻醉死亡4只,从造模后第2天开始,连续测量3天眼压,在
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