灯盏花提取成分对持续性高眼压大鼠视网膜基因表达的影响

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1、灯盏花提取成分对持续性高眼压大鼠视网膜基因表达的影响【关键词】视网膜持续性高眼压基因表达凋亡灯盏花［Abstract］ObjectiveToobservetheintraocularpressureandthegeneexpressionofretinaoftheratmodelofchronic,moderatelyelevatedintraocularpressure（IOP）byDSXdraHerbaErigerontis.Methods（1）BythemethodofAkira，theratmodelofchronic

2、,moderatelyelevatedintraocularpressureonitoredtheintraocularpressurecontinuouslyfor3dayandmadeOligogenearray.Results（1）TheaverageIOPmHgbeforeoperationanditelevated147%afteroperation.Onemonthlater,TheaverageIOPofmodelgroupesthanpreoperation.TheaverageIOPoftestgroupea

3、spreoperation.ConclusionDSXcouldprotecttheretinaoftheratmodelofchronic,moderatelyelevatedintraocularpressure.［Keyoderatelyelevatedintraocularpressure；geneexpression；apoptosis;HerbaErigerontis青光眼（glaua）是指与眼压升高有关的以视网膜神经纤维萎缩、视盘凹陷和视野缺损为主要特征的一组疾病，为临床常见的继白内障之后的第二位致盲性眼病。灯盏

4、花提取成分（DSX）是从中药灯盏花中提取的有效成分。目前已证明灯盏花具有活血化瘀、通窍明目的作用，能保护高眼压状态下的RGCs免受或少受损伤并挽救凋亡细胞［1］，在此基础上，我们进行了进一步的研究，现总结资料如下。1材料与方法1.1实验动物8～12周龄SD大鼠，体重约150～200g。均符合一级动物标准。饲料为全价鼠颗粒饲料。SD大鼠及饲料均由成都中医药大学实验动物中心提供（生产合格证：川实动管质第99-11号）。饲养室温10℃～15℃，相对湿度55%～75%，12h光照维持，自由摄食饮水。纳入标准：（1）无外眼部疾病。（2）

5、双眼瞳孔直接对光反射和间接对光反射正常。1.2主要试剂戊巴比妥钠（上海化学试剂厂分装）、1%地卡因（成都中医药大学附属医院制剂室）、0.25%氯霉素眼液（长春迪瑞制药有限公司）、RNAlater（QIAGEN公司）、EDTA-Na2（国药集团化学试剂有限公司）NucleoSpinRNAclean-up试剂盒（MACHEREY-NAGEL,Germany）等。DSX由中药灯盏花提取制成。1.3主要仪器电子秤（上海天平仪器厂）、电子天平（上海天平仪器厂）、眼科显微手术器械（苏州医疗器械厂）、眼科手术显微镜（苏州医疗器械设备厂）、

6、TONO-PEN笔式眼压计（美国Medtronicsolan公司）、眼科手术止血器（大连山木医疗器械厂）、大鼠Oligo芯片、LuxScan10KA双通道激光扫描仪（CapitalBio公司）等。1.4方法1.4.1动物分组动物购回后，适应性驯养3天，每天连续测量眼压，剔除平均眼压高于或低于正常眼压区间的大鼠，其余随机分为空白组、模型组和实验组3个组。空白组不造模，模型组和实验组右眼单眼造模。模型组于术后第4天开始每日用生理盐水3ml灌胃1次，实验组用DSX3ml，所有大鼠均于1个月后处死。1.4.2造模方法采用Akira法［

7、2］，烙闭SD大鼠右眼3支上巩膜静脉。1.4.3眼压测量及芯片制作（1）眼压测量：实验中所有眼压测量均在同一时间（9am～2pm）进行，连续测量的术前眼压的平均值作为正常眼压；术后即刻、术后1天、术后每7天各测1次眼压，共1个月。（2）芯片制作：大鼠脱颈处死，立即摘除眼球，从角巩膜缘切开眼球，剥离视网膜，提取totalRNA，再经纯化、荧光标记、杂交等过程制作成Oligo芯片，用LuxScan10KA双通道激光扫描仪进行扫描。1.4.4统计学方法采用SPSS14.0forWindows统计软件。自身左右眼及前后比较用配对t检验

8、，多组间两两比较用单因素方差分析（LSD法）。差异基因的挑选采用t-test。2结果2.1动物造模结果SD大鼠40只，经连续测量3天眼压，剔除眼压不合格的大鼠1只，其余39只随机分出空白组9只，其余SD大鼠进行造模。造模时麻醉死亡4只，从造模后第2天开始，连续测量3天眼压，在