补骨脂素加长波紫外线对hl-60细胞凋亡的影响

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1、补骨脂素加长波紫外线对HL?60细胞凋亡的影响【摘要】　　目的：探讨补骨脂素（psoralen,PSO）加长波紫外线（ultraviolet?A,UVA）的光化学疗法（PUVA）对人急性髓细胞白血病（FAB?M2）细胞株HL?60细胞凋亡的作用及部分作用途径。方法：以HL?60细胞株为研究对象，以0、10、20、40、80μg/mlPSO加波长为360nm的UVA，作用于HL?60细胞，通过流式细胞仪检测HL?60细胞在PUVA后的凋亡情况；电镜下观察细胞超微结构改变；荧光定量聚合酶链式反应（polymerasechainreaction,PCR）及流

2、式细胞技术检测Fas配体（Fasligand,FasL)在基因和蛋白水平的表达情况。结果：单纯PSO、单纯UVA照射及PUVA均可诱导HL?60细胞发生凋亡，PUVA的作用显著强于前两者。电镜下观察经PUVA处理后的HL?60细胞超微结构，可见明显的凋亡形态学改变。PSO、UVA照射及PUVA均可下调FasL在基因、蛋白水平的表达，PUVA的作用显著强于前两者。结论：PUVA可诱导白血病细胞HL?60发生凋亡，作用强于PSO及UVA照射。HL?60被PUVA诱导凋亡后FasL基因表达水平下调。【关键词】白血病HL60细胞细胞凋亡Fas配体紫外线疗法光化

3、学疗法补骨脂素　　Methods:TheHL?60cells.Thefactorialdesignandanalysisofvarianceongthefactors.　　Results:PSO,UVAandPUVAallinducedtheapoptosisandtheeffectsofPUVAicroscope.PSO,UVAandPUVAalldecreasedtheexpressionsofFasLgeneandprotein.TheeffectsofPUVAia;HL?60cells;apoptosis;Fasligand;ultraviol

4、ettherapy;photochemotherapy;psoralen　　补骨脂素（psoralen,PSO）是中药补骨脂种子中的主要成分，研究表明其具有光敏性质与抗肿瘤活性。本实验从中药补骨脂中提取出PSO，以不同浓度PSO加波长为360nm的紫外线（ultraviolet?A,UVA）（简称PUVA），作用于HL?60细胞，通过流式细胞仪检测HL?60细胞在PUVA后的凋亡情况；电镜下观察细胞超微结构改变；荧光定量聚合酶链式反应（polymerasechainreaction,PCR）及流式细胞技术检测Fas配体（Fasligand,FasL)在

5、基因和蛋白水平的表达，以探讨PUVA法诱导HL?60细胞凋亡的作用及部分作用途径。　　1材料与方法　　1.1细胞株人急性髓细胞白血病?M2型HL?60细胞株由大连医科大学惠赠。　　1.2药品及主要试剂PSO由大连理工大学及中国人民解放军第210医院合作从中药补骨脂中提取和制备，用乙醇溶剂提取和配制，PSO浓度为5mg/ml。二甲基亚砜（dimethylsulphoxide,DMSO）购自北京化工厂。RPMI1640培养液购自GIBCO公司。小牛血清购自杭州四季青生物材料工程公司。TRIzol购自美国GIBCOBRL公司。FasL基因检测试剂盒购自中山大

6、学达安基因股份有限公司。鼠抗人FasL（CD95Ligand）单克隆抗体试剂盒购自美国CALTAGTMLaboratories。　　1.3仪器和设备EPICSXL型流式细胞仪由美国贝克曼库尔特公司生产，GLY?10型光量子血液平衡治疗仪由徐州华卫医疗设备公司生产，DA7600型荧光定量PCR仪由中山大学达安基因股份有限公司生产。　　1.4细胞培养HL?60细胞常规培养于含15%小牛血清的RPMI1640培养基（含硫酸庆大霉素0.025U/ml）中，于37℃、5%CO2饱和湿度培养箱中进行连续培养，每2～3d换液1次。　　1.5实验分组依据是否采用紫外线

7、照射和PSO浓度不同将实验组分为HL?60细胞对照组、UVA照射组、PSO各浓度组及PUVA各浓度组，其中UVA照射时间为5min。　　1.6流式细胞术测定PUVA24h后HL?60细胞凋亡的情况取浓度为4.0×105/ml、处于对数生长期的HL?60细胞5ml，分别加入PSO0、10、20、40和80μl，使PSO在反应体系中的终浓度分别为0、10、20、40、80μg/ml，放入石英比色皿中，在GLY?10型光量子血液平衡治疗仪（λ=360nm）上以1J/m2辐射量边照射边震荡，照射时间分别为0和5min。处理后各实验组细胞继续培养24h，收集5.

8、0×105个细胞，用PBS洗2次，弃上清，加入100μl碘化丙啶染液，避光反应30min，加入