补骨脂素加长波紫外线照射对白血病k562细胞的杀伤作用

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1、补骨脂素加长波紫外线照射对白血病K562细胞的杀伤作用：张德杰，黄世林，陈楠楠，向阳，杨佩满，赵瑾瑶【关键词】补骨脂素［摘要］目的：探讨补骨脂的提纯物补骨脂素（psoralen）加长波紫外线（ultravioletAlight）照射光化学疗法，亦称PUVA（psoralenplusultravioletAlight）疗法，对慢性粒细胞白血病红白病变细胞株K562细胞的杀伤作用。方法：以传代培养的K562细胞为模型，采用四甲基偶氮唑盐比色法（monotetrazoliumtest,MTT）测定单纯补骨脂素、单纯紫外线照射及PUVA疗法对白血病细胞

2、的杀伤作用；采用流式细胞仪对其进行DNA含量分析，并用早期凋亡试剂盒AnnexinⅤFITC和碘化丙啶（propidineiodide,PI）双染法测定单纯补骨脂素对白血病细胞的作用；采用电镜技术对其进行形态学观察。结果：单纯补骨脂素或单纯紫外线照射对K562细胞均有杀伤作用，PUVA比单纯补骨脂素或单纯紫外线照射对K562细胞的杀伤作用有明显增强（P＜0.05)。PUVA处理后的白血病细胞通过流式细胞仪可以检测到亚二倍体凋亡峰。电镜下可见：细胞体积变小，胞浆浓缩，胞核染色质聚集或边集，核小体碎裂，大部分细胞呈典型的凋亡形态。结论：中药补骨脂提

3、纯物补骨脂素对人白血病细胞K562具有杀伤作用。补骨脂素具有光敏活性，结合360nm波长紫外线照射治疗对K562细胞的杀伤作用有明显增强。紫外线照射时间以10min为最佳；补骨脂素适宜的终浓度为40μg/ml。PUVA对人白血病细胞K562杀伤作用的机制主要是诱导细胞凋亡。　　［关键词］补骨脂素;光化学疗法;白血病,髓样,慢性;K562细胞系;细胞凋亡　　ABSTRACTObjective:ToobservetheeffectsofpsoralenplusultravioletAlight(PUVA)onK562cellsandtherelat

4、ivemechanism.Methods:Theeffectsofpsoralen,ultravioletAlightandPUVAonK562cellsonotetrazoliumtest(MTT).DNAcontentetry(FCM).TheapoptoticratesofK562cellstreatedlpsoralenfor24and48hoursissionelectronmicroscope(TEM).Results:EithersinglepsoralentherapyorsingleultravioletAirradiatio

5、nhadinhibitingeffectonK562cells.TheinhibitingeffectofPUVAonK562cellsaller,havingcondensedcellnucleus,assembledchromatin,disintegratednucleusbodyandthemajorityofthecellsappearedtobeapoptoticconformation.Conclusion:PsoralenhasinhibitingeffectonK562cells,andtheeffectofPUVAismor

6、esignificant.Itissuggestedthat10minirradiationand40μg/mlterminalconcentrationofpsoralenbeprobablythebestchoiceforPUVA.TheinhibitingeffectofPUVAisduetoapoptosis.　　KEYI1640培养液，美国GibcoBRL公司产品；小牛血清，杭州四季青生物材料工程公司产品；四氮唑蓝（monotetrazolium,MTT），美国Sigma公司产品；补骨脂素，大连理工大学提供；CO2细胞培养箱，美国Na

7、pco公司产品；Elx800自动酶标仪，美国BioTek公司产品；石英比色皿，宜兴市仪器仪表总厂产品；GLY10型光量子血液平衡治疗仪，徐州华卫医疗设备公司产品；体视显微镜，日本Olympus公司产品；流式细胞仪，美国BeckmanCoulter公司产品。　　1.2实验方法　　1.2.1细胞培养将慢性粒细胞白血病红白病变细胞株K562细胞置于含10%小牛血清、4万U/ml庆大霉素的RPMI1640培养基中，在温度37℃和5%CO2饱和湿度的培养箱中进行传代培养。　　1.2.2实验分组根据长波紫外线照射时间，将实验组分为以下PUVA4组：（1）0

8、min组，即对照组；（2）5min组；（3）10min组；（4）15min组。每一组中又按补骨脂素浓度（0、10、20、40、80μg/ml）分成5个