补骨脂素加长波紫外线诱导hl

《补骨脂素加长波紫外线诱导hl》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、补骨脂素加长波紫外线诱导HL：陈楠楠，张晨，王伟，张德杰，向阳，黄世林【摘要】目的研究补骨脂素（PSO）加长波紫外线（UVA）光化学疗法（PUVA）诱导人白血病细胞HL-60、NB4凋亡时对线粒体膜电位（ΔΨm）的影响。方法细胞与不同浓度PSO，接受或不接受UVA照射后共同培养，电镜下观察细胞超微结构改变，流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡率和线粒体膜电位变化，采用多因素方差分析法进行统计学处理。结果PUVA处理后的HL-60、NB4细胞超微结构出现明显的凋亡形态学改变；PSO、UVA照射及PUVA均可使细

2、胞凋亡率增加，ΔΨm下降，PUVA的作用显著强于前两者（P<0.01）。结论PUVA可诱导人白血病细胞发生凋亡，诱导凋亡的途径之一为下调线粒体膜电位水平。【关键词】光化学疗法；白血病；HL-60细胞；NB4细胞；凋亡；线粒体膜电位Abstract：ObjectiveTostudytheeffectsofpsoralen(PSO)plusultravioletA(PUVA)onmitochondrialmembranepotentialinHL-60andNB4cells.MethodsCellsic

3、roscope.Theapoptosisratiosandthechangesofmitochondrialmembranepotentialetry.Thefactorialdesignandanalysisofvarianceongthefactors.ResultsThereentitochondrialmembranepotential,andtheeffectsofPUVAitochondrialmembranepotential.Keyia;HL-60cell;NB4cell;apoptosi

4、s;mitochondrialmembranepotential补骨脂素(psoralen，PSO)是中药补骨脂种子中的主要成分，又称呋喃香豆素，具有光敏性质与抗肿瘤活性。PUVA是补骨脂素加长波紫外线光化学疗法，研究表明PUVA对人白血病细胞HL-60、K562、NB4均有一定的杀伤作用［1］，但其作用机制尚不清楚，本试验拟探讨PUVA对人白血病细胞HL-60、NB4细胞凋亡的作用及部分作用机制，为PUVA的临床应用提供理论依据。1材料与方法1.1细胞株人急性髓细胞白血病（FAB-M2）HL-60细胞由

5、大连医科大学惠赠；人急性髓细胞白血病（FAB-M3）NB4细胞由上海血液学研究所陈竺院士惠赠。1.2药品及主要试剂补骨脂素由大连理工大学及我院共同从纯中药补骨脂中提取和制备。二甲基亚砜（DMSO）购自北京化工厂。RPMI1640培养液、胎牛血清为Gibco产品。小牛血清系杭州四季青生物材料工程公司产品。JC-1为MolecularProbe公司产品。1.3仪器和设备流式细胞仪购自美国贝克曼库尔特公司，GLY-10型光量子血液平衡治疗仪由徐州华卫医疗设备公司研制。1.4细胞培养HL-60、NB4细胞分别常规

6、培养于含10%小牛血清及10%胎牛血清的RPMI1640培养基（含硫酸庆大霉素0.025U/ml）中，于37℃、5%CO2饱和湿度培养箱中进行连续培养。1.5透射电镜下观察细胞超微结构特点收集浓度为5.0×105/ml，经PUVA处理的HL-60、NB4细胞10ml，用PBS清洗2次，转入2.0ml离心管，离心（2000r/min）3min，弃上清，缓缓加入2.5%戊二醛2ml，4℃冰箱静置2h以上。磷酸缓冲液冲洗，锇酸固定，水洗、脱水，浸透、包埋，制定超薄切片，透射电镜下观察。1.6流式细胞术测定PUV

7、A24h后细胞的凋亡情况取浓度为4.0×105/ml，处于对数生长期的HL-60、NB4细胞株5ml，分别加入补骨脂素0，5，10，20，40μl，使其在反应体系中的终浓度分别为0，10，20，40，80mg/L，放入石英比色皿中，在GLY-10型光量子血液平衡治疗仪（λ=360nm）上以1J/m2辐射量边照射边震荡，照射时间分别为0min，5min。处理后各实验组细胞继续培养24h后，收集5.0×105细胞，用PBS洗2次，弃上清，加入100μl碘化丙啶（PI）染液，避光反应30min，加入PBS400

8、μl，上机检测，并用Multicycle软件分析得出相应的细胞凋亡百分率。1.7流式细胞术测定PUVA24h后细胞线粒体膜电位的变化情况试验分组及处理方法同前。收集1×106个细胞，重悬于1mlPBS中，加入200μmolJC-110μl，37℃、5%CO2孵育15~30min，2mlPBS洗1次，室温下离心（1000r/min）3min，弃上清，加500μlPBS，轻摇试管使细胞重悬，上机检测，用50mmolCCCP1μl，