补骨脂素加长波紫外线光化学疗法对k562细胞凋亡及线粒体膜电位的

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1、补骨脂素加长波紫外线光化学疗法对K562细胞凋亡及线粒体膜电位的黄世林,陈楠楠,向阳,张晨,张励,张德杰【摘要】目的：研究补骨脂素（psoralen,PSO）加长波紫外线（ultraviolet?A,UVA）光化学疗法（PUVA）对人白血病细胞K562凋亡及线粒体膜电位的影响。方法：K562细胞与不同浓度PSO，接受或不接受UVA照射后共同培养，透射电子显微镜下观察细胞超微结构改变，流式细胞仪检测细胞凋亡率和线粒体膜电位变化，采用多因素方差分析法进行统计学处理。结果：PUVA处理后的K562细胞超微结构出现明显的凋亡

2、形态学改变。PSO、UVA照射及PUVA均可使细胞凋亡率增加，线粒体膜电位下降；PUVA的作用显著强于前两者（P<0.01）。结论：PUVA可诱导白血病K562细胞发生凋亡，诱导凋亡途径之一为下调线粒体膜电位水平。【关键词】补骨脂素;光化学疗法;白血病;K562细胞;细胞凋亡;线粒体膜电位Methods:K562cellslfor24hours)andirradiatedin).Thechangesinultrastructureofthecellsissionelectronmicroscope.Theapo

3、ptosisratesandthechangesofmitochondrialmembranepotentialsetry.Thefactorialdesignandanalysisofvarianceongthefactors.Results:Therel).PSO,UVAandPUVAallincreasedtheapoptosisratesanddecreasedthemitochondrialmembranepotentials,andtheeffectsofPUVAitochondrialmembranep

4、otentials.Keyotherapy;leukemia;K562cells;apoptosis;mitochondrialmembranepotential补骨脂素（psoralen,PSO）是中药补骨脂(PsoraleacorylifoliaL.)种子中的主要成分，又称呋喃香豆素。PSO加长波紫外线（ultraviolet?A,UVA）的光化学疗法（简称PUVA）对人白血病细胞HL?60、K562、NB4均有一定的杀伤作用［1］，但其作用机制尚不清楚，本实验拟探讨PUVA对K562细胞凋亡的作用及部分作用机制

5、，为PUVA的临床应用提供理论依据。1材料与方法1.1细胞株人红白血病K562细胞株，由大连医科大学人体解剖与组织胚胎学教研室惠赠。1.2药品及主要试剂PSO注射剂，46%乙醇溶解为5mg/ml，大连理工大学及中国人民解放军第210医院合作从中药补骨脂中提取和制备；二甲基亚砜（dimethylsulphoxide,DMSO），购自北京化工厂；RPMI1640培养液购自Gibco公司；小牛血清，购自杭州四季青生物材料工程公司；JC?1试剂盒，为MolecularProbe公司产品。1.3仪器和设备EPICSXL型流式细

6、胞仪，购自美国BeckmanCoulter公司；GLY?10型光量子血液平衡治疗仪，购自徐州华卫医疗设备公司。1.4细胞培养K562细胞常规培养于含10%小牛血清的RPMI1640培养基（含硫酸庆大霉素0.025U/ml）中，于37℃、5%CO2饱和湿度培养箱中进行连续培养。1.5实验分组依据是否采用UVA照射和PSO浓度不同，将实验组分为K562细胞对照组、UVA照射组、PSO各浓度（10、20、40、80μg/ml）组及PUVA各浓度（10、20、40、80μg/ml）组，其中UVA照射时间为5min。1.6透射

7、电子显微镜下观察K562细胞超微结构收集浓度为5.0×105/ml，经80μg/mlPUVA处理的K562细胞10ml，用PBS清洗两次，转入10ml离心管，离心（2000r/min）3min，弃上清，缓缓加入2.5%戊二醛2ml，4℃冰箱静置2h以上。磷酸缓冲液冲洗，锇酸固定，经水洗、脱水、浸透和包埋后，制作超薄切片，透射电子显微镜（transmissionelectronmicroscope,TEM）下观察K256细胞超微结构。1.7流式细胞术测定PUVA24h后K562细胞的凋亡情况取浓度为4.0×105/ml

8、，处于对数生长期的K562细胞5ml，分别加入PSO0、10、20、40、80μl，使其在反应体系中的终浓度分别为0、10、20、40、80μg/ml，放入石英比色皿中，在GLY?10型光量子血液平衡治疗仪（λ=360nm）上以1J/m2辐射量边照射边震荡，照射时间分别为0min和5min。处理后各实验组细胞继续培养24h，收集5.0×105个