细胞蜡块免疫标记在浆膜腔积液腺癌细胞病理学诊断中的意义

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1、细胞蜡块免疫标记在浆膜腔积液腺癌细胞病理学诊断中的意义　　浆膜腔积液常是恶性肿瘤的晚期临床表现之一。目前，细胞病理学检查仍是诊断恶性浆膜腔积液最常用的方法之一，也是确诊的主要手段。恶性浆膜腔积液多为腺癌细胞，而间皮病变细胞形态多变，与腺癌细胞常难以区别，易造成诊断困难、漏诊或误诊。现针对66例可疑异型腺上皮的浆膜腔积液标本，探讨细胞蜡块结合免疫标记在浆膜腔积液腺癌细胞病理学诊断中的临床价值。　　1材料与方法　　1．1材料　　收集皖南医学院弋矶山医院病理科2011－2013年间送检的通过细胞普通涂片筛选出的66例可疑异型腺上皮的浆膜腔积液标本。其

2、中胸水40例、腹水25例、心包积液1例。所有病例均由两位高年资病理医师依据2006年《浆膜腔积液细胞病理学诊断》标准，结合免疫标记结果进行细胞病理学诊断。　　1．2方法　　1．2．1细胞普通涂片的制作浆膜腔积液标本按常规操作制成多张普通细胞涂片，1张行HE染色后光镜下观察，初步筛查出66例可疑异型腺上皮病例，余涂片备用免疫化学染色。　　1．2．2细胞蜡块切片的制作66例浆膜腔积液标本再经沉淀、离心、固定后，将细胞块取出放入小包埋盒进行常规脱水等流程处理后，石蜡包埋，制成细胞蜡块，4μm切片多张，1张常规HE染色，制成细胞蜡块切片观察，余切

3、片备用免疫化学染色。　　1．2．3免疫化学染色66例标本相应细胞普通涂片和细胞蜡块切片分别行免疫标记。一般将一张细胞普通涂片十字划分为四个区域，同时行四种免疫标记;一般一张细胞蜡块切片行一种免疫标记。免疫标记采用SP法，选择性标记CKpan(AE1/AE3)、EMA(E29)、Calretinin(CＲ，SP13)、MC(HBME－1)、CEA(CEA－31)、TTF－1(8G7G3/1)等指标，以上一抗均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。DAB显色，苏木素复染，光镜下观察，以异型细胞胞膜、胞质或胞核出现棕黄色染色为阳性表达。操作严格按流程进行

4、。　　1．2．4诊断方法初步筛查出的66例可疑异型腺上皮的浆膜腔积液标本，每例同时应用以下三种方法进行最终诊断:细胞普通涂片、细胞普通涂片免疫标记和细胞蜡块切片免疫标记。　　1．2．5统计学分析应用SPSS17．0统计软件对实验数据进行处理，两两间比较采用χ2Fisher精确检验，P＜0．05为差异有统计学意义。　　2结果　　2．1浆膜腔积液标本三种方法腺癌细胞检出率66例可疑异型腺上皮的浆膜腔积液标本，通过细胞普通涂片确诊为腺癌细胞的有29例，检出率43．9%(29/66);通过细胞普通涂片的免疫标记确诊为腺癌细胞的有50例，检出率7

5、5．8%(50/66);通过细胞蜡块切片的免疫标记确诊为腺癌细胞的有61例，检出率92．4%(61/66，见表1)。后两者方法均较仅依赖细胞普通涂片阳性检出率高，差异有统计学意义(P＜0．01)，而细胞蜡块切片免疫标记又较细胞普通涂片免疫标记阳性检出率高，差异有统计学意义(P＜0．01)。余5例均为增生的间皮细胞。经细胞普通涂片确诊的29例和细胞普通涂片免疫标记确诊的50例，均包含在经细胞蜡块切片兔疫标记确诊的61例病例中，无误诊现象，其漏诊病例均为将可疑异型细胞判断为间皮细胞所致。最终确诊的61例病例，后经临床、影像学及相关实验室检查得到相应

6、证实。　　　　2．2细胞病理检查　　2．2．1HE染色镜下观61例恶性浆膜腔积液均为腺癌细胞，排列方式可构成多种图案。浆膜腔积液腺癌细胞在细胞普通涂片中多呈球团状排列，无明显腺样结构，细胞散乱，背景脏杂(图1A，见第342页)，观察耗时、费力;而在细胞蜡块切片中多呈腺管样排列，腺体结构常见，细胞集中，背景清晰(图1B，见第342页)，观察省时省力。　　2．2．2免疫化学染色腺癌细胞一般表达AE1/AE3、EMA、CEA、TTF－1等指标，不表达CＲ、MC、p63和LCA等指标。细胞普通涂片中腺癌细胞AEI/AE3的免疫标记染色背景深、阳性染色细

7、胞定位不准确，判断困难(图2A，见第342页);细胞蜡块切片免疫标记染色背景清晰、阳性染色细胞定位准确，易于判断(图2B，见第342页)。　　2．3细胞病理诊断　　61例恶性浆膜腔积液均为腺癌细胞。结合免疫标记结果，38例胸水中肺32例、消化道4例、乳腺1例、卵巢/子宫内膜1例;22例腹水中消化道17例、卵巢/子宫内膜5例;心包积液1例于肺(见表2)。　　　　3讨论　　对于恶性肿瘤引起的浆膜腔积液，影像学检查由于受积液干扰一般无法准确观察原发灶，也无法通过内镜活检、体外穿刺及手术切除获得组织标本，只能依靠浆膜腔积液细胞病理学检测寻找恶性证据。因

8、此浆膜腔积液细胞病理学诊断可能是这类患者唯一能起到确诊作用的选择。　　传统的细胞病理学诊断一般采用细胞涂片的方式，其假阴性率过高，且不能确定具体类型，