玻璃体条件培养液对人视网膜色素上皮细胞生长活性及

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1、玻璃体条件培养液对人视网膜色素上皮细胞生长活性及【摘要】　　目的：探讨在含有人玻璃体的条件培养液作用下体外培养的人视网膜色素上皮（HRPE）细胞形态学、细胞生长活性及细胞周期的改变。方法：将HRPE细胞培养在含100，250，500，1000mL/L人玻璃体的DMEM条件培养液(VCM)。用倒置显微镜观测细胞的形态学改变，分别用MTT、流式细胞术检测细胞的生长活性及细胞周期的改变。结果：不同体积分数的VCM使HRPE细胞的形态发生了改变，HRPE细胞出现了多核及更早的脱色素，类似成纤维细胞表型的生长状态。含100，250及50

2、0mL/L玻璃体体积的VCM处理后HRPE细胞的增长活性与对照组相比存在显著性差异（P均＜0.01），其中含250mL/L玻璃体的VCM刺激HRPE细胞增生的能力最强。VCM促使更多的HRPE细胞进入了DNA合成期（S期，6％～13％），含250与500mL/L玻璃体体积的VCM使HRPE细胞出现了异倍体的改变。结论：一定体积分数的VCM使HRPE细胞的S期比例增加，细胞增生能力增强。【关键词】视网膜色素上皮细胞　玻璃体　MTT　细胞周期　DNA倍体　流式细胞术　　Effectofvitreousconditionalmedi

3、umonhumanretinalpigmentepitheliumcells'proliferationandcelldividingcycleAbstractAIM:Toinvestigatethechangeofcellularmorphology,cellproliferativeactivityandcelldividingcycleinhumanretinalpigmentepithelium(HRPE)cellsaftertreatmentofhumanvitreousconditionalmedium(VCM).

4、METHODS:HRPEcellsL/Lhumanvitreousrespectively.Cellularmorphology,cellproliferativeactivityandcelldividingcyclechangesicroscope,MTTassayandFloetry(FCM)assayrespectively.RESULTS:HRPEcellsshoenting,fibroblast-likephenotype.ForHRPEcellsproliferativeactivity,thereentalgr

5、oup,especiallyforVCML/Lvitreous.VCMincreasedtheHRPEcells'proportionofphaseS(6％～13％)andheteroploidL/Lvitreous.CONCLUSION:VCMcanincreasetheSphaseproptioninHRPEcells'celldividingcycle,andincreasetheirproliferativeactivity.·KEYTT;celldividingcycle;DNAploidy；Floetry　　0引言

6、增生性玻璃体视网膜病变（PVR）是裂孔性视网膜脱离手术失败的最主要原因,也是眼外伤、血管性和炎症性视网膜病变的一种结局[1]。它的启动和发展表现为过度的创伤愈合过程，其基本病理过程是视网膜色素上皮细胞（RPE）的移行、增生，在视网膜前和膜后及玻璃体腔内形成增生膜，最终增生膜的收缩导致牵拉性视网膜脱离，属于增生性疾病[2]。现已有大量关于生长因子，细胞因子通过复杂的信号途径作用于RPE细胞，导致其病理性增生的实验性研究的报道[3]。目前虽已明确，视网膜神经层损伤后造成的RPE细胞与玻璃体的接触是PVR发生的高危因素[4],但玻璃

7、体作用的具体机制仍未明确。有报道表明在PVR这一病理过程中玻璃体液内多种细胞因子的含量发生了改变[5，6]。也有学者发现，PVR患者的玻璃体液能促进增生膜中胶原的合成以及增生膜的收缩，从PVR的不同环节参与疾病的演进过程[7，8]。Norbert等[9]发现RPE细胞接触正常玻璃体后会导致其基因表达的改变。Kirchhof等[10]则发现正常玻璃体液能促进使HRPE细胞的形态学发生改变、增强其迁移及增生能力。细胞周期（celldividingcycle）[11]指细胞从一次分裂结束开始生长到下一次分裂终止所经历的过程。细胞周期

8、的概念由Horesco公司，胎牛血清（FBS）购自天津TBD公司，碘化丙啶（PI）购自SIGMA公司。1.2方法参照Stramm等[13]的视杯消化法：取供体眼后，庆大霉素8万U浸泡消毒20min，去除晶状体、玻璃体、视网膜神经层。用胰酶消化30min，1000r/min离心