cd4+ cd25high t细胞和foxp3在不明原因复发性自然流产中的作用

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1、CD4+CD25highT细胞和FOXP3在不明原因复发性自然流产中的作用：梅珊珊谭剑平陈慧刘颖琳刘玉昆祝丽琼张建平【摘要】【目的】检测不明原因复发性自然流产(URSA)患者外周血及蜕膜的CD4+CD25highT细胞和FOXP3的表达，探讨CD4+CD25highT细胞和FOXP3在母胎免疫耐受中的作用。【方法】选择从2005年9月至2006年6月就诊的154例URSA患者根据就诊时的妊娠状态分成未孕组129例，早期流产组25例;正常早孕要求人工终止妊娠的妇女组50例及正常未孕女性组42例为对照组。收集所有研究对

2、象的外周血及由于计划外妊娠要求行人工流产者和已确认胚胎停育的URSA患者行清宫术后的新鲜蜕膜组织，采用流式细胞仪分析外周血及蜕膜组织CD4+CD25+调节性T细胞及其亚群的比例及FOXP3表达。【结果】①外周血及蜕膜中CD4+CD25highT细胞的比例：正常早孕妇女外周血CD4+CD25highT细胞高于正常未孕妇女及URSA流产组，差异有统计学意义(P<0.01)，URSA未孕患者外周血CD4+CD25highT细胞也显著低于正常未孕女性及URSA流产患者(P<0.01);URSA流产患者蜕膜CD4

3、+CD25highT细胞低于正常早孕妇女蜕膜(0.62±0.27vs.1.41±0.31，P<0.01)。②外周血及蜕膜中FOXP3表达比例：正常早孕妇女外周血CD4+CD25highT细胞中FOXP3的表达比例为(95.6±3.6)，高于正常未孕妇(92.1±3.4)及URSA流产患者，差异有统计学意义(P<0.01;P<0.05);URSA未孕组患者外周血中FOXP3的表达与正常未孕妇女及URSA流产组之间相比无统计学差异(P>0.05);URSA流产患者蜕膜CD4+CD25highT细

4、胞中FOXP3的表达比例低于正常早孕妇女蜕膜，差异有统计学意义(94.3±3.1vs.97.1±2.2，P<0.01)。【结论】CD4+CD25highT细胞在维持正常妊娠中发挥重要作用，URSA的发生与CD4+CD25highT细胞的减少有关，URSA患者CD4+CD25highT细胞比例下降与FOXP3表达的降低有关。【关键词】复发性流产;妊娠;调节性T细胞;FOXP3;蜕膜　Abstract：【Objective】TodetecttheproportionsofCD4+CD25highcellsandF

5、OXP3expressioninperipheralbloodanddeciduaofURSApatientsandexplorethefunctionofCD4+CD25highcellsandFOXP3expressiontomaternofetalimmunologicaltolerance.【Methods】Atotalof154URSApatientsfromTheDepartmentofObstericsandGynecologyatTheSecondAffiliatedHospitalofSunYat

6、-senUniversityfromSeptember2005toJune2006iscarriageconfirmedbyultrasonography.Meaneninationsesterand42volunteersalreproductiveeninnon-pregnantconditionascontrolgroups.HeparinizedvenousbloodmediatelyfromallstudyobjectsanddecidualsamplespatientsL，肝素抗凝，Ficoll-Hyp

7、aque法密度离心分离外周血单个核细胞(PMBC)，制成细胞悬液。分成两个试管，两管均加CD4-FITC，CD25-PE抗体各5μL，室温、避光孵育20min;加入0.5mL破膜缓冲液;4℃避光孵育30min;2mLPBS洗涤1次，1000r/min(r=15cm)离心5min，弃上清，悬浮细胞;1mL破膜缓冲液洗一次;1μL正常大鼠血清、50μL破膜缓冲液4℃避光孵育15min;一管加10μLAPC大鼠IgG2a同型对照抗体，另一管加10μLAPC-抗人Foxp3抗体，4℃避光孵育30min;1mL破膜缓冲液洗一

8、次;450μLPBS悬浮细胞，上机检测。记录CD4+CD25+调节性T细胞亚群及FOXP3表达比例。　　1.4蜕膜流式细胞检测　　收集由于计划外妊娠要求行人工流产者和已确认胚胎停育的URSA流产组患者行清宫术后的新鲜蜕膜组织，制备蜕膜T细胞悬液，将细胞悬液顺序用CD4-FITC抗体、CD25-PE抗体、APC-抗人FOXP3抗体标记，通过孵育、透化等处理后，