对小鼠黑色素瘤细胞肺转移的抑制作用mgm

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1、对小鼠黑色素瘤细胞肺转移的抑制作用mGM【关键词】黑色素瘤InhibitionoflungmetastasisofB16melanomacellstransfectedurinegranulocytemacrophagecolonystimulatingfactorinmice　【Abstract】AIM:ToinvestigatetheinhibitionoflungmetastasisofmelanomabyatumorvaccineofB16melanomacellstransfectedurinegran

2、ulocytemacrophagecolonystimulatingfactor(mGMCSF).METHODS:ThemurinemelanomacelllineB16idcontainingmGMCSF.AcelllinestablyexpressingmGMCSFiceinisteredi.v.GMCSFrespectivelyandthelungmetastasisined2GMCSFtranfectionandtheexpressionofmGMCSFedbyRTPCR.Thenumberoflungm

3、etastaticlesionsofmicetreatedicetreatedGMCSFtransfectioncansignificantlysuppressthelungmetastasisofmelanomainmice.TheGMCSFcanbeapromisingadjuvantintheimmunotherapyofmelanoma.　　【Keyelanoma;mice;granulocytemacrophagecolonystimulatingfactor;lungneoplasms/seconda

4、ry;cancervaccines　　【摘要】目的：探讨小鼠粒细胞巨噬细胞－集落刺激因子（mGMCSF）基因转导对B16黑色素瘤细胞肺转移的抑制效果.方法：应用脂质体将含有mGMCSF基因的真核表达载体转染B16小鼠黑色素瘤细胞，经G418加压筛选后，挑选表达mGMCSF基因的B16黑色素瘤细胞.观察转导或未转导mGMCSF基因的B16黑色素瘤细胞在Balb/c小鼠体内的肺转移.结果：转导mGMCSF基因的B16黑色素瘤细胞可以稳定表达mGMCSF，在小鼠模型上其肺转移灶数目显著少于未转染基因的黑色素瘤细胞对照组

5、，二者差异显著（n=5,125.8±34.3vs27.8±24.0,P<0.01）.结论：mGMCSF转导可显著抑制小鼠黑色素瘤细胞B16的肺转移，提示GMCSF具有治疗黑色素瘤的临床应用前景.　　【关键词】黑色素瘤；小鼠；粒细胞巨噬细胞－集落刺激因子；肺肿瘤/继发性；癌症疫苗　　0引言　　黑色素瘤是一种恶性程度很高的恶性肿瘤，早期即可发生肺、脑转移.其发病率有逐渐增高的趋势，然而目前尚无有效的治疗方法［1-3］.近年来，免疫治疗已经成为黑色素瘤治疗研究的一个热点［2,4-5］，其中，联合细胞因子的肿瘤细胞

6、免疫是一个重要的方向，可以涉及几乎全部与免疫系统相关的细胞因子.GMCSF具有可增强粒细胞、巨噬细胞活性，增强MHCⅠ,MHCⅡ,B7分子的表达，增强抗原提呈功能等广泛的生物学活性，因而可能在肿瘤的免疫治疗中具有着重要作用.我们拟将GMCSF基因转染黑色素瘤细胞系B16，观察其对黑色素瘤细胞生长及转移的影响，为抗黑素瘤免疫治疗进行有益的尝试.　　1材料和方法　　1.1材料B16小鼠恶性黑色素瘤细胞系、含有鼠GMCSF基因的真核表达质粒pGEMTeasymGMCSF和E.coliJM109为本室保存.质粒提取试剂盒

7、购自博大泰克生物技术有限公司；RNA提取试剂盒、RNA逆转录试剂盒均为美国Promega公司产品；限制性内切酶、AMV逆转录酶、随机引物均为宝生物公司产品；透析胎牛血清、DMEM培养基、G418,脂质体转染试剂盒均为Gibco公司产品；6～8周龄雄性Balb/c小鼠购自军事医学科学院实验动物中心.　　1.2方法根据mGMCSF序列及pcDNA3.1多克隆酶切位点设计引物，上游:5′GCTAGCACCATGTAACTGCAGAATTTAC3′,下游5′CTCGAGCTCATTTTTGGACTGGTTTTT3′.引物

8、由上海博亚生物工程有限公司合成.以pGEMTeasymGMCSF质粒为模板,上述mGMCSF基因特异引物按常规方法进行PCR扩增.将PCR反应产物进行10g/L琼脂糖凝胶电泳分析.通过Nucleotrapkit(Clontech)回收阳性PCR产物.将回收的mGMCSF基因及pcDNA3.1分别用以NheI和EcoRI双酶切,并用T4DNA连接酶连接后，转化E.coliJ