axl去糖基化对小鼠肝癌细胞淋巴道转移的抑制作用

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1、Axl去糖基化对小鼠肝癌细胞淋巴道转移的抑制作用计：学位论文：33页表格：2个插图：17幅李吉指导教师：赵永福教授申请学位级别：硕士学位专业名称：外科学论文提交日期：2012年4月论文答辩日期：2012年5月学位授予单位：大连医科大学学位授予日期：2012年6月评阅人：答辩委员会主席：独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的

2、说明并表示谢意。学位论文作者签名：巷告签字日期：飞丛生年!月堡日目录一、摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(一)中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(二)英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯OQOD⋯⋯⋯⋯⋯3二、正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5(一)前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5(二)材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯000⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6(三)结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯10(四)讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯17(五)结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯20(六)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯21三、文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24(一)综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24(二)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯29四、附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯32五、致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33Axl去糖基化对小鼠肝癌细胞淋巴道转移的抑制作用硕士生姓名：李吉指导教师：赵永福教授指导小组：贾莉教授专业名称：外科学摘要肿瘤转移不仅是恶性肿瘤的特征，而且是恶性肿瘤患者的主要死因。因此，研究肿瘤的具体转移

4、机制具有十分重要的意义。淋巴道转移、腹腔种植和血道转移是肿瘤三种主要的转移方式，其中最常见的是淋巴道转移，而其机制还不是十分清楚。有研究结果显示，虽然肿瘤细胞所在的微环境影响着肿瘤的转移，但是其自身的特性也影响着肿瘤转移，例如细胞表面糖蛋白的糖基化调节就发挥着重要的作用。Axl是属于受体酪氨酸激酶家族(receptortyrosinekinases，RTKs)的一种跨膜糖蛋白，其特点是由两个免疫球蛋白样的结构域和两个纤维连接蛋白III型重复序列相连构成的胞外配体结合域，以及胞内区的酪氨酸激酶结构域。随着研究的深入，发现Axl过表达时具有致癌潜能。Axl的过表达与多种癌细胞的侵袭和转移密

5、切相关，已发现在髓细胞性白血病、肺癌、结肠癌、前列腺癌、乳腺癌和胃癌等患者中均存在Axl过表达。这些研究结果提示Axl可能在肿瘤发展中发挥重要作用，但其发生机制到目前为止还不是很清楚。Axl作为细胞表面的跨膜糖蛋白，至今几乎没有研究从糖基化的角度去分析与肿瘤淋巴道转移的关系。糖基化是细胞表面受体蛋白翻译后修饰的主要类型之一，研究表明，细胞表面糖蛋白的糖基化特定改变能提高肿瘤细胞的转移效率。尤其，蛋白N．糖基化越来越多的被认为是在肿瘤生成和转移过程中最显著的生化改变。因此，有必要深入研究分析Axl的糖基化调节对肿瘤细胞淋巴道转移的影响。本实验采用的Hca．F细胞与Hca—P细胞是从615

6、小鼠腹水型肝癌细胞H22中筛选出的一对遗传背景相似、高度同源、具有不同淋巴道转移能力的肝癌细胞株，Hca．F是具有高淋巴道转移潜能的细胞株(>80％)；Hca—P是具有低淋巴道转移潜能(<30％)，它们的主要差异集中在淋巴道转移表型上，因是本研究较理想的细胞模型。目的：探讨Axl去糖基化对小鼠肝癌细胞增殖、侵袭及淋巴道转移能力的影响。方法：以糖链抑制剂衣霉素(Tunicamycin)和肽N一糖苷酶F(PNGaseF)处理Hca—F细胞，通过WestenBlot法观察Axl糖基化的改变；应用MTT实验、体外侵袭实验和体内淋巴道转移实验观察Axl去糖基化对Hca—F细胞的增殖、侵袭及淋巴道

7、转移能力的影响。结果：用衣霉素和肽N一糖苷酶F(PNGaseF)处理Hca—F细胞后，Axl糖蛋白的表达明显改变，且都出现了新的脱糖蛋白质条带；同时，该细胞在体外的增殖、侵袭及体内的淋巴道转移力下降(木尸<0．05)。结论：衣霉素和肽N．糖苷酶F(PNGaseF)能够阻断Hca-F细胞表面的Axl糖基化过程；Axl去糖基化能够抑Nd,鼠肝癌细胞Hca-F的增殖、侵袭及淋巴道转移能力。关键词：Axl糖基化肝癌细胞淋巴道转移2Theinhibito