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1、梅毒螺旋体的实验室常见的诊断方法综述 梅毒危害极大,在我国曾一度被消灭,但随着近年来对外交流的日益频繁又死灰复燃,发病率呈逐年上升趋势。2012年国家卫生部公布的甲、乙类法定报告传染病中,梅毒发病率较2011年上升3.27%,死亡率上升5.36%,应引起重视。因此早期检出患者,及时治疗,控制传染源,是控制梅毒传播的重要措施。梅毒检测方法有多种,现就梅毒螺旋体的实验室常见的诊断方法作一简要综述。 1、病原体的检测 对患者分泌物进行观测,如发现运动的苍白螺旋体即可确诊为梅毒,该方法特异性高,但灵敏度稍低,容易漏检。梅毒检测适
2、用于早期梅毒皮肤黏膜损害,对硬下疳尤为重要,因为人体感染TP3~6周后,才能通过梅毒螺旋体抗原血清试验(TPHA)、梅毒荧光抗体(FTA)等敏感性、特异性较高的方法检测到血清中的抗体,在患者血清抗体达到可测水平之前,TP检查是早期诊断梅毒最好的方法。 1.1暗视野显微镜(DF)检查梅毒螺旋体暗视野检查法是梅毒病原体检测的主要方法。在皮损处,用玻片刮取组织渗出液或淋巴结穿刺液,用500暗视野显微镜观察,在暗背景上,梅毒螺旋体呈白色发光、运动快速、急促,也可较缓慢地围绕长轴旋转。根据其典型的形态、大小和运动方式,结合临床症状可直
3、接诊断梅毒。暗视野检查法特异性高,适用于早期梅毒的诊断。但由于受病程、取材、检测人员技术水平以及部分患者不规则使用抗生素导致TP数量减少和活动力下降的影响,敏感性较低为54.4%,因此此法检查阴性也不能排除患梅毒的可能。该法简单、快速,但不适用于潜伏及晚期梅毒患者。且口腔中可能存在其他螺旋体,因此此法对口腔病灶材料亦不适用。 1.2活体组织检查梅毒螺旋体常用银染色法(DI)是一种集光学、光电学、电子学、医学影像学和多媒体计算机技术于一体的高科技医学显微设备,其具有共轭变焦、高清晰度、高分辨率、高放大倍率的特点,有效放大倍率可
4、达20000倍以上。可以快速、便捷的进行标本观测。 其在Ⅰ期梅毒诊断的阳性率为83.75%,但由于设备昂贵难以普及。 2、梅毒血清学检查 机体感染梅毒螺旋体后可产生两种抗体,一种是抗梅毒螺旋体的特异性抗体(IgM和IgG);一种是非梅毒螺旋体特异性的抗体,即反应素。梅毒血清学检查包括非梅毒螺旋体抗体检测(非特异性抗体检测)和特异性梅毒螺旋体抗体检测。前者敏感性、特异性均较后者低,但由于抽血后1h即可出结果,费用也低廉,因此常用于临床筛选。并且非特异性抗体在治疗后下降或消失,因此可判定治疗效果。后者敏感性和特异性均较高,主
5、要用于确认试验,但由于其不随治疗下降或消失,故不能用于判定治疗效果。 2.1非梅毒螺旋体血清试验非梅毒螺旋体血清试验检测的为非特异性抗体(反应素),某些其他疾病患者如结核、红斑狼疮、类风湿性关节炎、猩红热等甚至健康人中也可出现反应素,因此可出现生物学假阳性。 此外,标本溶血或容器污染等亦可引起假阳性反应,其特异性较低。经治疗后患者反应素可消失或阴转,通常用于疗效观察、判断复发及再感染。 2.1.1性病研究实验室试验(VDRL):以心磷脂、胆固醇及卵磷脂的混悬液作为抗原,与机体产生的反应素在体外发生反应。属于微量玻片法,操
6、作简单、快速,对诊断神经梅毒有重要价值,敏感性可达99%,特异性达70.8%。可作定量及定性试验,但对一期梅毒敏感性低。 2.1.2快速血浆反应素环状卡片试验(RPR):VDRL试验的改良。用标准活性炭颗粒吸附VDRL抗原,操作简单、快速,结果易于观察,灵敏度较VDRL高,是目前临床应用最多的检测方法之一。RPR可检测滴度,滴度可在治疗后半年到2年下降4倍,滴度变化是观察治疗效果、复发或再感染的重要指标。RPR试验和DF方法相结合,可早期诊断梅毒。其缺点是反应素水平过高可产生假阴性结果。该法对神经梅毒、潜伏期梅毒不敏感。
7、2.1.3不加热血清反应素玻片试验(USR):为改良的VDRL试验,待检血清不需加热灭活,直接在玻片上进行絮状反应,肉眼判读结果。此法敏感性高而特异性较低,易发生生物学假阳性,亦可作为疗效观察、判断复发或再感染的指标。 2.1.4甲苯胺红不加热血清实验(TRUST):其原理是以甲胺苯红染料颗粒代替炭颗粒作为指示物,当液体中出现凝集程度不同的红色凝块时即判为阳性,简便快速,结果判读以白色纸卡为背景,清晰易判,稳定性好。对于非梅毒螺旋体特异性抗体的检测,TRUST法的检出率和重复性均优于RPR法。但由于在梅毒感染的早期和潜伏期,
8、血清中反应素很少,其检出率亦较低,分别为72.7%和73.7%。 2.2梅毒螺旋体血清试验此类试验采用的抗原是梅毒螺旋体或其成分,检测血清中的抗梅毒螺旋体IgM和/或IgG抗体,其敏感性和特异性均较高,一般用作确证试验。但由于特异性IgG抗体可终身存在,因此不能用作疗效观察