梅毒实验室诊断方法.doc

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1、梅毒实验室诊断梅毒的实验室诊断方法主要有显微镜检查法和血清学检测法。一、显微镜检查法（一）暗视野显微镜检查【基本原理】梅毒硬下疳、扁平湿疣、黏膜斑等皮损的渗出液涂片，以及淋巴结穿刺液涂片等，在暗视野显微镜下，光线从聚光器的边缘斜射到涂片上的梅毒螺旋体而发出亮光，从而可根据其特殊形态和运动方式进行检测。【仪器材料】1．暗视野显微镜。2．钝刀（刮勺）、载玻片、盖玻片、注射器具、无菌生理盐水。【标本采集】1．皮肤黏膜组织液：无菌生理盐水浸湿的棉拭子擦去皮损表面的污物，钝刀轻刮、挤压皮损表层，取渗出液与预先滴加在载玻片上的生理盐水混合后加盖玻片镜检。2．淋巴

2、液：无菌操作下穿刺淋巴结，注入生理盐水并反复抽吸2～3次，取少量的淋巴液直接滴于载玻片上，加盖玻片镜检。【操作步骤】1．加镜油：在暗视野显微镜的聚光器上滴加镜油。2．聚光：将标本玻片置载物台上，上升聚光器使镜油接触载玻片底面。3．镜检：在镜下观察，寻找有特征形态和运动方式的梅毒螺旋体。【结果判读】11111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111、

3、告111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111梅毒螺旋体在暗视野显微镜镜下表现为纤细、白色、有折光的螺旋状微生物，长5～20mm，直径小于0.2mm，有6～12个螺旋，具有旋转、蛇行及伸缩等三种特征性的运动方式。暗视野显微镜下发现有上述特征的螺旋体为阳性结果。【结果报告】1．阳性：见到上述特征的梅毒螺旋体。2．阴性：未见到上述特征的梅毒螺旋体。【

4、临床意义】1．暗视野显微镜检查阳性,可确诊梅毒。2．螺旋体检查是诊断早期现症梅毒的最好方法，世界卫生组织指定为性病实验室必备项目之一。3．如未见到梅毒螺旋体，并不能排除患梅毒的可能性，应复查和血清学检查。【注意事项】1.取材时尽量避免出血，以免影响镜下观察。2.取材后应立即置暗视野显微镜下观察。3.镜下观察时应注意与其他螺旋体相鉴别。（二）镀银染色检查【基本原理】梅毒螺旋体具有亲银性，可被银溶液染色，从而可以在镜下观察到梅毒螺旋体。【仪器材料】1．显微镜。2．罗吉氏固定液、鞣酸媒染剂、Fontana氏银溶液。【标本采集】1.皮肤黏膜组织液：无菌生理盐

5、水浸湿的棉拭子擦去皮损表面的污物，钝刀轻刮、挤压皮损表层，取渗出液涂片。2．淋巴液：无菌操作下穿刺淋巴结，注入生理盐水并反复抽吸2～3次，取少量的淋巴液直接滴于载玻片上。【操作步骤】1．涂片干燥：将标本涂于干净载玻片作一薄片，于空气中自然干燥。2．固定：用固定液将涂片固定2～3分钟。3．洗涤：用无水乙醇洗涤玻片上的油污。4．媒染：加媒染剂于涂片上，微加热产生蒸汽，染30秒。5．银染：水洗，加银染液于涂片上，微加热产生蒸汽，染30秒。6．镜检：水洗、待干，用油镜检查。【结果判读】显微镜下见到染成棕褐色的梅毒螺旋体为阳性结果。【结果报告】1．阳性：见到染

6、成棕褐色梅毒螺旋体。2．阴性：未见到染成棕褐色的梅毒螺旋体。【临床意义】同暗视野显微镜检查法。【注意事项】应注意与其他螺旋体加以鉴别。二、血清学检测法（一）非梅毒螺旋体抗原血清试验非梅毒螺旋体抗原血清试验，包括性病研究实验室（VDRL）试验、快速血浆反应素（RPR）环状卡片试验、甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）等。nVDRL试验【基本原理】梅毒螺旋体感染人体后，宿主会产生抗类脂抗原的抗体（反应素），与一定比例的心磷脂、卵磷脂及胆固醇混合物抗原反应，可检测梅毒患者血中的抗类脂抗原的抗体。【仪器材料】1.水平旋转仪、显微镜。2.试剂盒：VDRL抗原原

7、液、VDRL缓冲液、抗原滴管及针头、带直径14mm漆圈的玻璃反应板、VDRL试验结果参照图片。3.30mL平底玻璃小瓶、生理盐水。【标本采集】1.血清：抽取静脉血，室温静止凝固后，分离新鲜血清。也可采用冻存的血清。2.脑脊液：采用腰椎穿刺术获得，应由相关专业人员操作。【操作步骤】1.VDRL抗原配制。2.VDRL玻片定性试验（1）灭活：血清标本56℃灭活30分钟。（2）吸样：吸取0.05mL血清放入反应板圈中，将血清涂布到整个圈内。（3）加抗原：用标准针头加入1滴抗原。（4）反应：将反应板置水平旋转仪上旋转4分钟，〔(180±5)次/分钟〕，立即置低

8、倍显微镜下观察。3.VDRL定量试验（1）加稀释液：在圈内加入0.05mL生理盐水（根据需要确定稀释度）。（