梅毒实验室诊断技术课件

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1、实习十梅毒实验室诊断技术实验(三)流行病学教研室一、实验目的通过对梅毒实验室检测方法的学习，了解和掌握某些传染病的快速筛查方法在流行病学调查中应用的重要作用。二、实验原理根据《中华人民共和国传染病防治法》及《中华人民共和国传染病防治法实施办法》特制定梅毒诊断标准及处理原则GB15974—1995血浆反应素环状卡片TRUST试验-（定量法）此试验是VDRL试验的一种改良方法。优点是试剂及对照血清已标准化，费用低。此法操作简单，肉眼即可读出结果。螺旋体体内的心磷脂、卵磷脂及胆固醇具有抗原性，可诱发机体产生（心磷脂或卵磷脂）反应素，该反应素可与从动物中提取的心磷脂（VDRL）抗原

2、在体外发生抗原抗体反应。将VDRL抗原吸附于活性炭颗粒表面，当遇到梅毒血清抗体(IgG、IgM)时，在物理的摇动、碰撞下，微粒便相互粘附而形成肉眼可见的黑色凝集颗粒，其结果便是阳性（+）。实验原理本试验适用于一期梅毒(阳性率75％～85％)及二期梅毒(阳性率100％)诊断。也适用于疗效观察，判定复发及再感染的监测，由于操作简便，出结果快，亦适用于普查、婚检、产前检查及其它健康检查等。三、试剂与器材1、试剂盒：梅毒快速血浆反应素诊断试剂上海科华生物技术有限公司2、0.85％生理盐水；3、采集静脉血2.0ml,分离血清或血浆备用；4、加样器（100ul)、吸头（100ul)。四

3、、操作步骤1.A行除第1孔外，所有孔中均加入50μl生理盐水；2.在第1孔、第2孔中分别加入50μl待检样本；3.用加样器在第2孔混合后，吸出50μl至第3孔内，再混匀，依次作倍比稀释至第6孔，混匀后弃去50μl；4.第7孔用作阳性对照，加入50μl阳性血清；5.在板中每一孔加入50μl的甲苯胺红抗原悬液，注意如从高浓度至低浓度加入，应更换吸头；6.按每分钟100转摇动8-10分钟，置室温，肉眼可观察结果。四.操作步骤孔号12345678稀释倍数原倍1:21:41:81:161:32阳性K阴性K生理盐水(ul)-50.050.050.050.050.0--样品(ul)50.

4、050.050.050.050.050.0弃50.0--阳性血清(ul)------50.0-阴性血清(ul)-------50.0抗原悬液(ul)50.050.050.050.050.050.050.050.0按每分钟100转速度，摇动卡片8-10分钟，置室温，肉眼观察结果.五、结果判定以出现凝集颗粒判为阳性，当凝集达到100%时可判++++，当凝集达到75%时可判+++,当凝集达到50%时可判++,当凝集达到25%时可判+,当凝集<25%或无凝集现象时可判±或-。活动性梅毒抗体滴度在≥1:8以上才有诊断意义。六、注意事项本试验在23℃-29℃环境下进行。TRUST试剂使

5、用前应充分摇匀。此方法主要用于梅毒的筛选和治疗效果的观察，初诊病人抗体滴度如果<1:8时应同时作特异性抗体试验证实或考虑其它疾病。注意事项作为治疗效果观察时，恢复期病人第一年内每三个月复查一次，以后每半年复查一次观察抗体，随访2-3年。四、实习报告1、实验目的;2、实验原理;3、试剂与器材;4、实验方法;5、结果判定;6、结果讨论。2005.12.12.谢谢！黄桂蓉