prp对兔来源脂肪间充质干细胞wnt3基因和klotho基因表达的影响

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1、PRP对兔来源脂肪间充质干细胞Wnt3基因和Klotho基因表达的影响前言自体脂肪移植因其无排斥反应，取材容易，操作简单，外形充盈好，不会传染疾病等优点在临床得到广泛应用。应用自体脂肪移植达到预期填充效果的同时还具有美体塑形的效果，得到研究学者及临床医生的认可。吸脂和颗粒脂肪移植技术已经比较成熟，临床上广泛应用于各种软组织缺陷和塑形，是良好的软组织充填材料。但是脂肪移植也有其不如意之处。通常情况下自体脂肪移植是将吸脂后纯化所得的脂肪颗粒注入组织缺损部位，但是脂肪颗粒吸收率较高，质量和体积的吸收率可以达到50%以上，同时会带来一些并发症，为了达

2、到满意的效果需行多次手术才能达到要求。脂肪干细胞在2001年被Zuk等[1]于脂肪抽吸术抽取的脂肪中提取出来，而后发现在不同培养基作用下，可诱导其向脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞、肌细胞、神经细胞[2]、胰岛细胞[3]等分化。Yoshimura等[4]发现将经分离取得的自体脂肪干细胞与自体脂肪颗粒混合后行注射移植，能提高移植脂肪组织的存活率。2008年，刘乃军等[5]将这项技术应用于临床，收到较为满意效果。基于上述研究结果，我们可以推测，脂肪干细胞的质量和增殖能力在一定程度上可以提高脂肪组织移植的成活率。脂肪干细胞在脂肪移植中的作用目前存在两方

3、面假说：一方面，脂肪干细胞在这种特定环境下可分化为成熟脂肪细胞，增加细胞数量；另一方面，脂肪干细胞也可分化为血管内皮细胞，并分泌多种生长因子，从而解决移植区血供问题。脂肪干细胞还具有以下优点：①储量丰富，充足②获取方法简单③脂肪组织中干细胞含量丰富④ADSCs增殖能力强，多次传代遗传性状仍稳定⑤属自体移植，无排斥反应。所以脂肪干细胞作为组织工程的种子细胞越来越受到关注[1、6]。富血小板血浆（PRP）是从自体血液中提取的血小板浓缩血浆，通常通过二次离心法得到，具有促进干细胞的增殖和成骨等作用，同时还具有获取容易，对人体损伤小，不存在免疫排斥反

4、应，富含各种生长因子。2011年，陈锦、胡刚[7]等首次把PRP引入脂肪移植的基础研究，在细胞实验中发现PRP可促进兔脂肪干细胞增殖，刘景兰、胡刚[8]等在后续试验中发现在小鼠脂肪颗粒移植实验中，在移植物中加入脂肪干细胞可提高移植后脂肪组织的存活率，在脂肪干细胞的基础上加入PRP组织新生血管生成增加更为明显，组织存活率进一步提高，其分子生物学机制有待深入探讨。生物的一切生命活动期本质皆与基因的作用有关，它通过控制转录和翻译进而影响机体性状表达，对细胞的代谢、增殖、分化、凋亡等发挥重要作用。我们之前的实验已经证明PRP在24h，48h，72h均

5、对兔ADSCs有促增殖作用，且有显著的统计学意义。PRP富含多种生长因子，可以推断某一种或几种生长因子作用于脂肪干细胞，可能是促使脂肪干细胞某一个或多个基因的启动，进而起到促增殖作用。促进脂肪干细胞的增殖，减少其凋亡，是我们急需解决的问题。本实验已知PRP对脂肪干细胞具有促进增殖作用，而从基因层面研究其发生机理，对此国内外文献未见报道。....材料与方法一、实验动物我们挑选体重2Kg左右的新西兰雄性大白兔，实验动物来自大连大学实验动物培育中心。二、试剂及仪器三、试剂配制10%水合氯醛麻醉剂：取5g水合氯醛粉末，溶解于50ml三蒸水中，混匀，室

6、温下避光保存。抗凝剂：取1.9g柠檬酸钠晶体，溶解于50ml三蒸水中，混匀，4℃保存，使用时先抽至注射器，抗凝剂：血液比例为1：10。磷酸盐缓冲液（PBS）：取PBS粉末5g，溶解于1000ml三蒸水，高压灭菌，将试剂瓶用封口膜封口，室温保存。脂肪组织缓冲剂：取50mlPBS无菌缓冲液，以10:1的比例加入双抗（1ml），置于高压灭菌后的玻璃瓶，封口膜封口，4℃保存。胶原酶：取胶原酶粉末100mg，加入灭菌的PBS缓冲液100ml，分装至15ml离心管，-20℃保存。完全培养基：在超净台内配制，取无菌玻璃瓶，加入1ml双抗，胎牛血清20ml，

7、高糖DMEM79ml，封口膜封口，4℃储存。成脂诱导培养液：取无菌玻璃瓶，加入胎牛血清10ml，1umol/L地塞米松50μl，10mg/L胰岛素500μl，0.5mmol/L1-甲基-3-异丁基-黄嘌呤（IBMX）300μl，0.2mmol/L吲哚美辛500μl，1ml双抗，高糖DMEM培养基88ml，封口膜封口，4℃储存。成骨诱导培养液：取无菌玻璃瓶，加入胎牛血清10ml，50mg/L维生素C400μl，10mmol/Lβ-甘油磷酸钠1000μl，0.1umol/L地塞米松5μl，1ml

8、双抗，高糖DMEM培养基88ml，封口膜封口，4℃储存。油红O染色液：取油红O粉末0.25g，加入50ml异丙醇中，混合均匀，4℃避光保存，作为油红O储备液。取油红