乙醇对人骨髓间充质干细胞神经肽及凋亡相关基因表达的影响

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1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterTheeffectofethanolonthemRNAexpressionofneuropeptidereceptorandapoptosisinhumanbonemarrowmesenchymalstemcellsBy：KaiJingSupervisor：Prof．YishengWangOrthopediceTheFirstAffiliatedHospitalofZhengZhouUniversityMay2013学位论文原创性声明

2、本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：茑t1札日期：如J弓年厂月弓f日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部

3、或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：盖l}缈日期：为，弓年f月乃JH摘要乙醇对人骨髓间充质干细胞神经肽及凋亡相关基因表达的影响研究生荆凯导师王义生教授郑州大学第一附属医院骨科河南郑州450052背景：近年来乙醇导致股骨头坏死(osteonecrosisofthefemoralhead，ONFH)的临床报道日渐多见，现在已成为非创伤性股骨头坏死的重要诱因，

4、但确切病理学机制仍不完全清楚。研究发现，人骨髓中存在一种骨髓问充质干细胞(humanbonemarrowmesenclymalstemcells，hBMSCs)，hBMSCs具有多向分化潜能，在特定的条件下可分化为成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞、神经细胞等，这种分化受多种神经递质影响，人骨髓中存在的某些神经递质具有促进成骨和成血管作用，能够促使hBMSCs向骨组织或血管组织分化，保持正常的骨代谢。凋亡是自然的生理过程，由于内外环境激发所致细胞自身主动、有序的死亡方式，过程涉及精确的基因转录和蛋白质合成。半胱氨酸蛋白酶．3(caspase一3)作为

5、凋亡重要的效应蛋白，其活性测定成为凋亡相关研究的重要指标。于此同时，B淋巴细胞瘤．2(bcl．2)作为一种调节细胞凋亡的重要基因，具有抑制凋亡作用。目的：观察在乙醇作用下人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)qb降钙素基因相关肽受体(CGRPR)、凋亡相关基I因bcl．2弄lcaspase．3、过氧化物酶体增殖子活化受体-Y(PPAR吖)、及成骨转录因子(Runx2)mRNA表达的变化。摘要方法：”使用密度梯度离心贴壁培养获得hBMSCs，流式细胞仪鉴定后传至第3代，随机分为实验组及对照组，实验组加入浓度为0．09mol／L乙醇，对照组正常培养。培养

6、11天后，采用实时定量．聚合酶链反应(RT-qPCR)分析两组神经肽受体CGRPR、PPAR吖、Rull)(2及凋亡相关基因bcl．2、caspase一3mRNAI均表达。结果：1．原代细胞接种24h后，大量类圆形或多角形细胞贴壁。72h后出现梭形贴壁细胞及细胞集落，胞质丰富伸出突起、核居中。3-11d贴壁细胞明显增多，细胞集落持续增大并逐渐融合，细胞呈漩涡状、辐射状平行排列，细胞界限不清。对原代培养的hBMSCs细胞进行流式细胞仪检测细胞表面标志物结果显示，CD44、CD29阳性表达率分别为(94．2±0．5)％、(92．3-t-0．7)％，而

7、CD45、CD34表达率分别为(5．6±0．5)％、(2．7±0．8)％，结果表明本研究分离培养细胞为hBMSCs。2．实验组CGRPR、Runx2、bcl。2mRNA表达较对照组降低，CGRPR(1．90E-01±4．12E·02VS3．27E-01±8．24E一02，t=6．66，p<0．05)、Runx2(1．28E一01--3．18E-02VS2．50E-01±5．33E-02，t=8．80，p<0．05)、bcl-2(1．65E一01±3．98E·02VS2．95E-01±6．78E-02，t=7．35，p<0．05)，caspase-

8、3mRNA与PPAR-7mRNA表达较对照组增高，Caspase一3(5．27E-01±1．26E-02VS3．17E-01±7．46E