骨髓间充质干细胞与骨髓瘤细胞株相互作用后对骨髓间充质干细胞april、fap、baff、igf-1和基因表达谱的影响

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1、江苏大学硕士学位论文骨髓间充质干细胞与骨髓瘤细胞株相互作用后对骨髓间充质干细胞APRIL、FAP、BAFF、IGF--1和基因表达谱的影响姓名：李皎申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：朱彦20120609江苏大学硕士学位论文摘要目的研究正常骨髓间充质干细胞(BMMSC)与骨髓瘤细胞株相互作用过程中，对BMMSC成纤维细胞激活蛋白(FAP)、增殖诱导配体(AP砒L)、B细胞激活因子(BAFF)和胰岛素样生长因子(IGF．1)在mRNA表达水平以及对全基因表达谱的影响。方法1、RT．PCR方法测定FAP、APRIL、BAFF和IGF．1在共培养

2、前后BMMSC基因表达分3组：1)对照组A：BMMSC单独培养7天(n-9)；2)实验组B：BMMSC与U266细胞Transwell非直接接触共培养7、12天(n=9)；3)实验组C：BMMSC与RPMl8226细胞Transwell非直接接触共培养7、12天(n=9)。A、B、C组细胞部分收集提取总RNA，Real．TimePCR法测定BMMSC中FAP、APRIL、BAFF、IGF．1mRNA表达水平，并进行统计学分析比较。2、BMMSC全基因组表达芯片检测。分为对照组、与骨髓瘤细胞株共培养组，以及共培养后继续培养组。1)对照组：BMMS

3、C单独培养7天(n_3)；2)共培养组：BMMSC与骨髓瘤细胞(U266混合RPMl8226细胞)Transwell非直接接触共培养7天(n=3)；3)共培养后继续培养组：BMMSC与骨髓瘤细胞(U266混合RPMl8226细胞)Yranswell非直接接触共培养7天去除骨髓瘤细胞株后继续在L．DMEM条件下培养7天(n=3)。培养结束后将上述三组BMMSC收集后，全基因组表达芯片检测。通过基因芯片方法比较对照组、共培养组和继续培养组BMMSC基因表达改变，并通过RT-PCR方法进骨髓间充质干细胞与骨髓瘤细胞株相互作用后对骨髓间充质干细胞APR

4、JL、FAP、BAFF、IGFoi和全基因表达谱的影响一步证实。3、A、B、C组细胞成骨分化：将A、B、C组BMMSCs在7天和12天时间点加入成骨细胞诱导液，诱导时间为21天，取BMMSCs分别进行碱性磷酸酶(NAP)和茜素红(ARS)染色以检测BMMSCs的成骨分化能力。结果1、倒置显微镜下观察，A、B、C组BMMSC形态均以长梭形为主，呈贴壁生长，BMMSC形态无明显差异。2、检测BMMSC成骨能力：采用ARS染色及NAP染色方法结果显示：经过成骨诱导21天后，A、B、C组BMMSC均具有成骨分化能力；ARS结果显示：与A组相比，B、C组

5、BMMSC钙结节减少，提示成骨分化能力减弱。3、Real．time．PCR结果显示：与A组相比，B、C组的FAP、APRIL、BAFF和IGF．1基因表达水平有改变。骨髓瘤细胞(U266和RPMl8226)与BMMSC共培养后，BMMSC的基因表达发生改变，结果如下：(1)实验组B、C组在7d时间点上APRIL基因mRNA相对拷贝数分别为0．7078+0．1855署no．7978+0．4585，均明显低于对照组A，且P值分别为0．0139和0．005：均P<0．05。实验组B、C组在12d时间点上APRIL基因mRNA相对拷贝数分别为1．358

6、4-0．7119和1．059+0．8817，与A组相比没有明显改变，P值分别为0．5718禾H0．1474，均P>0．05。(2)实验组B、C组在7d时间点上FAP基因mRNA相对拷贝数分别为1．5934-0．9007和1．3634-1．107；均明显低于对照组，P值分别为O．0085和0．0082；均P<0．01。实验组B、C组在12d时间点上FAPIl江苏大学硕士学位论文基因mRNA相对拷贝数分别为2．101+1．174和1．9894-1．702；与A组相比没有明显统计学差异；P值分别为0．9126和0．7477，均P>0．05。(3)实验

7、组B、C组在7d时间点上BAFF基因mRNA相对拷贝数分别为2．874+3．514和1．752+1．439；与A组相比，没有统计学差异，P值分别为O．8049和O．2117；均P>0．05。实验组B、C组在12d时间点上BAFF基因mRNA相对拷贝数分别为4．6364-3．622和3．2744-2．614；与A组相比，没有统计学差异，P值分别为O．1145和0．4685，均P>0．05。(4)实验组B、C组在7d时间点上IGF．1基因rnRNA相对拷贝数分别为1．2454-1．231和1．5834-1．947；与A组相比，没有统计学差异，P值分

8、别为0．5561和O．8177，均P>0．05。实验组B、C组在12d时间点上IGF．1基因mRNA相对拷贝数分别为2．4354-2．091和2．02