临床应用改良法制备prp对兔来源脂肪间充质干细胞成脂分化和细胞增殖影响

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1、中图分类号密级临床应用改良法制备PRP对免来源脂肪间充质干细胞成脂分化和细胞增殖影响TheeffectofTubexmodificationPRPontheadipogenicdifferentiationandproliferation计：学位论文33页表格：6个表格：／r插图：8幅指导教师：胡刚教授申请学位级别：硕士学位培养单位：大连医科大学彭祖荣学科(专业)：外科学完成时间：二O一三年五月答辩委员会主席：独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文

2、中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：丛渔蓝签字日期：丝!!年』月血曰关于学位论文使用授权的说明本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权大连医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于

3、(请在以下相应方框内打“、，”)：1．保密口，在年解密后适用本授权书。2．不保密口。作者签名：导师签名：日期：≯fj年岁月卜19日期夕叼肄j月／"IP日目录一、摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(一)中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(二)英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3二、正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4(一)前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4(一)刚舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4(二)材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯51．实验动物⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯52．试剂和仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯53．试剂配制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯54．实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯75．统计学处理⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯10(三)结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯101．干细胞的形态学和多向诱导分化能力鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯102．血小板血浆计数⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯113．成脂量吸光度值测量⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯114．细胞增殖吸光度值测量⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯12(四)讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯141．干细胞的免疫特性和多项分化潜能⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯142．种子细胞的选择⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯153．PRP制备方法的比较⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯154．PRP对干细胞增殖能力的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯165．原代提取中的注意事项和干细胞的鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯176．PRP对干细胞成脂分化的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯17(五)结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯19(六)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

6、20三、综述⋯⋯⋯OOOQOima⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22(一)综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22(二)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯29四、致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33大连医科大学硕士学位论文临床应用改良法制备PRP对兔来源脂肪间充质干细胞成脂分化和细胞增殖影响硕士生姓名：彭祖荣指导老师：胡刚教授指导小组：秦宏智教授李芳教授专业名称：外科学摘要目的：讨论临床应用Tubex改良法制各自体富血小板血浆(platelet—richplasma，PRP)对兔来源脂肪

7、间充质干细胞(adipose—derivedstemcells，ADSCs)成脂分化及细胞增殖的影响。方法：I型胶原酶消化获得的新西兰大白兔附睾部脂肪组织，体外分离、培养得到脂肪间充质干细胞，采用形态学和多向诱导分化进行鉴定。取新西兰大白兔腹主静脉血，传统二次离心法和Tubex(封闭离心装置)改良法制备PRP(platelet—richplasma)，显微镜下分别对两组PRP行血小板计数。CCK-8试剂盒，采用酶标仪于450nm处分别测定Tubex改良法PRP组、传统二次离心法PRP组、对照组、空白组四组细胞在不同时间点(7d、10d、14d

8、)吸光度值。在同等条件下，经异丙醇萃取出细胞内脂滴染色的油红O，酶标仪于510nm处测定Tubex改良法PRP组、传统二次离心法PRP组、对照组、空白组四组细胞在不