bfgf对缺氧复氧体外骨骼肌细胞bc1┐2表达的影响

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1、bFGF对缺氧复氧体外骨骼肌细胞Bc1┐2表达的影响摘要:目的观察碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对缺氧复氧（A/R）损伤后肌细胞凋亡（apoptosis）相关基因蛋白Bc1-2表达的影响.方法将培养的骨骼肌细胞分为正常对照组、A/R组及浓度分别为10，20和40μgL-1的bFGF预处理加A/R组共5组，然后用免疫组化方法（ABC法）进行染色，统计分析Bc1-2阳性的肌细胞百分率、平均吸光度的变化.结果经bFGF预处理后，Bc1-2阳性的肌细胞百分率（如bFGF20μgL-1组与对照组相比，23

2、.3%→34.7%，P<0.01）、平均吸光度（如bFGF20μgL-1组与对照组相比，0.13→0.20，P<0.01）均显著增加.结论bFGF对A/R损伤的骨骼肌细胞的凋亡可能具有抑制作用.　　Keyuscle，skeletal/cytology;cellhypoxia;genes，Bcl-2　　Abstract:AIMToobservetheBcl-2expressiononthecul-turedskeletalmusclecellsinneonatalratsinjuriedb

3、yanoxia/reoxygenation（A/R）andpreconditionedbybasicfibroblastgroyocytesintofivegroups，includingcontrolgroup，anoxia/reoxygenation（A/R）group，bFGFpreconditionedmunohistochemicalmethod（ABCmethod）todyecultureskeletomyocytes.RESULTSBeingpreconditionedbybFGF，B

4、cl-2positiveskeletom-yocytes’percentagerose（suchasbFGF20μgL-1groupparedtocontrolgroup，23.3%→34.7%，P<0.01）andaveragelightdensityincreased（suchasbFGF20μgL-1groupparedtocontrolgroup，0.13→0.20，P<0.01）.CONCLUSIONbFGFprobablyinhibitstheoccurrenceofapop

5、tosisofculturedskeletomyocytesinjuriedbyA/R.　　0引言　　我们应用培养的新生大鼠骨骼肌细胞缺氧复氧（anoxia/reoxygenation，A/R）损伤模型，观察成纤维细胞生长因子（basicfibroblastgroLL-1CO2恒温孵箱，bFGF（由北京双鹭生物技术有限公司提供），0.2m2的恒温（37℃）密闭容器，900mLL-1N2，100mLL-1CO2，抗Bc1-2抗血清、Ni-DAB葡萄糖氧化酶系统（购自北京中山生物技术公司），CMIAS图

6、像分析仪（北京航空航天大学研制）.　　1.2方法无菌取出生3d内的EM培养基中，于100mLL-1CO2孵箱培养，用差速贴壁法去除非成肌细胞.观察至卫星细胞（satellitecell，SC）发育成成肌细胞（myoblast）（约2.5d）时，以1×108L-1细胞密度转种于内置盖玻片，用多聚赖氨酸包被的12孔培养板，培养24h后换无血清培养液.实验分为5组，Ⅰ组为正常对照组;Ⅱ组为A/R组，给予等量磷酸盐缓冲液（PBS）;Ⅲ，Ⅳ和Ⅴ组为bFGF干预组，A/R前分别在无血清培养液中加入不同浓度（10

7、，20及40μgL-1）的bFGF.用无血清培养基孵育12h以后，A/R组及Ⅲ，Ⅳ，Ⅴ组，同时移至0.2m2的恒温（37℃）密闭容器内，连续充以无氧气体（900mLL-1N2，100mLL-1CO2），流速为200mLmin-1，6h后取出，再置含900mLL-1空气，100mLL-1CO2的培养箱内复氧12h.Ⅰ组，培养板持续置于孵箱内培育.实验结束后，细胞用40gL-1多聚甲醛固定，抗Bc1-2抗血清按1200倍稀释，按ABC法对各组细胞进行免疫组化染色，用Ni-DAB葡萄糖氧化酶系统显色，光镜

8、下棕黄色为Bc1-2阳性细胞.100倍光镜下计数30个相邻视野中Bc1-2免疫反应阳性细胞（棕黄色为Bc1-2阳性细胞）占总细胞数百分比，并作显微照相，在CMIAS图像分析仪上用吸光度组件对Bc1-2免疫反应阳性细胞作平均吸光度的色谱分析.　　统计学处理:实验数据用Excel软件处理，实验结果以x±s表示，组间差异用t检验.　　2结果　　Ⅰ组肌细胞对Bc1-2有一定表达（Fig1），Ⅱ组肌细胞表达很低（Fig2），而经bFGF预处理的A/R后的肌细胞Bc1-2免疫反应