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时间:2018-04-30
《bfgf对缺氧复氧体外骨骼肌细胞bc1┐2表达的影响》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、bFGF对缺氧复氧体外骨骼肌细胞Bc1┐2表达的影响摘要:目的观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对缺氧复氧(A/R)损伤后肌细胞凋亡(apoptosis)相关基因蛋白Bc1-2表达的影响.方法将培养的骨骼肌细胞分为正常对照组、A/R组及浓度分别为10,20和40μgL-1的bFGF预处理加A/R组共5组,然后用免疫组化方法(ABC法)进行染色,统计分析Bc1-2阳性的肌细胞百分率、平均吸光度的变化.结果经bFGF预处理后,Bc1-2阳性的肌细胞百分率(如bFGF20μgL-1组与对照组相比,23
2、.3%→34.7%,P<0.01)、平均吸光度(如bFGF20μgL-1组与对照组相比,0.13→0.20,P<0.01)均显著增加.结论bFGF对A/R损伤的骨骼肌细胞的凋亡可能具有抑制作用. Keyuscle,skeletal/cytology;cellhypoxia;genes,Bcl-2 Abstract:AIMToobservetheBcl-2expressiononthecul-turedskeletalmusclecellsinneonatalratsinjuriedb
3、yanoxia/reoxygenation(A/R)andpreconditionedbybasicfibroblastgroyocytesintofivegroups,includingcontrolgroup,anoxia/reoxygenation(A/R)group,bFGFpreconditionedmunohistochemicalmethod(ABCmethod)todyecultureskeletomyocytes.RESULTSBeingpreconditionedbybFGF,B
4、cl-2positiveskeletom-yocytes’percentagerose(suchasbFGF20μgL-1groupparedtocontrolgroup,23.3%→34.7%,P<0.01)andaveragelightdensityincreased(suchasbFGF20μgL-1groupparedtocontrolgroup,0.13→0.20,P<0.01).CONCLUSIONbFGFprobablyinhibitstheoccurrenceofapop
5、tosisofculturedskeletomyocytesinjuriedbyA/R. 0引言 我们应用培养的新生大鼠骨骼肌细胞缺氧复氧(anoxia/reoxygenation,A/R)损伤模型,观察成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgroLL-1CO2恒温孵箱,bFGF(由北京双鹭生物技术有限公司提供),0.2m2的恒温(37℃)密闭容器,900mLL-1N2,100mLL-1CO2,抗Bc1-2抗血清、Ni-DAB葡萄糖氧化酶系统(购自北京中山生物技术公司),CMIAS图
6、像分析仪(北京航空航天大学研制). 1.2方法无菌取出生3d内的EM培养基中,于100mLL-1CO2孵箱培养,用差速贴壁法去除非成肌细胞.观察至卫星细胞(satellitecell,SC)发育成成肌细胞(myoblast)(约2.5d)时,以1×108L-1细胞密度转种于内置盖玻片,用多聚赖氨酸包被的12孔培养板,培养24h后换无血清培养液.实验分为5组,Ⅰ组为正常对照组;Ⅱ组为A/R组,给予等量磷酸盐缓冲液(PBS);Ⅲ,Ⅳ和Ⅴ组为bFGF干预组,A/R前分别在无血清培养液中加入不同浓度(10
7、,20及40μgL-1)的bFGF.用无血清培养基孵育12h以后,A/R组及Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ组,同时移至0.2m2的恒温(37℃)密闭容器内,连续充以无氧气体(900mLL-1N2,100mLL-1CO2),流速为200mLmin-1,6h后取出,再置含900mLL-1空气,100mLL-1CO2的培养箱内复氧12h.Ⅰ组,培养板持续置于孵箱内培育.实验结束后,细胞用40gL-1多聚甲醛固定,抗Bc1-2抗血清按1200倍稀释,按ABC法对各组细胞进行免疫组化染色,用Ni-DAB葡萄糖氧化酶系统显色,光镜
8、下棕黄色为Bc1-2阳性细胞.100倍光镜下计数30个相邻视野中Bc1-2免疫反应阳性细胞(棕黄色为Bc1-2阳性细胞)占总细胞数百分比,并作显微照相,在CMIAS图像分析仪上用吸光度组件对Bc1-2免疫反应阳性细胞作平均吸光度的色谱分析. 统计学处理:实验数据用Excel软件处理,实验结果以x±s表示,组间差异用t检验. 2结果 Ⅰ组肌细胞对Bc1-2有一定表达(Fig1),Ⅱ组肌细胞表达很低(Fig2),而经bFGF预处理的A/R后的肌细胞Bc1-2免疫反应
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