bfgf对缺氧复氧体外骨骼肌细胞bc1┐2表达的影响论文

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1、bFGF对缺氧复氧体外骨骼肌细胞Bc1┐2表达的影响论文.freeluscle，skeletal/cytology;cellhypoxia;genes，Bcl-2Abstract:AIMToobservetheBcl-2expressiononthecul-turedskeletalmusclecellsinneonatalratsinjuriedbyanoxia/reoxygenation（A/R）andpreconditionedbybasicfibroblastgroyocytesintofivegroups，includingcontro

2、lgroup，anoxia/reoxygenation（A/R）group，bFGFpreconditionedmunohistochemicalmethod（ABCmethod）todyecultureskeletomyocytes.RESULTSBeingpreconditionedbybFGF，Bcl-2positiveskeletom-yocytes’percentagerose（suchasbFGF20μgL-1groupparedtocontrolgroup，23.3%→34.7%，P0.01）andaveragelightdensi

3、tyincreased（suchasbFGF20μgL-1groupparedtocontrolgroup，0.13→0.20，P0.01）.CONCLUSIONbFGFprobablyinhibitstheoccurrenceofapoptosisofculturedskeletomyocytesinjuriedbyA/R.0引言我们应用培养的新生大鼠骨骼肌细胞缺氧复氧（anoxia/reoxygenation，A/R）损伤模型，观察成纤维细胞生长因子（basicfibroblastgroLL-1CO2恒温孵箱，bFGF（由北京双鹭生物技术有限

4、公司提供），0.2m2的恒温（37℃）密闭容器，900mLL-1N2，100mLL-1CO2，抗Bc1-2抗血清、Ni-DAB葡萄糖氧化酶系统（购自北京中山生物技术公司），CMIAS图像分析仪（北京航空航天大学研制）.1.2方法无菌取出生3d内的EM培养基中，于100mLL-1CO2孵箱培养，用差速贴壁法去除非成肌细胞.观察至卫星细胞（satellitecell，SC）发育成成肌细胞（myoblast）（约2.5d）时，以1×108L-1细胞密度转种于内置盖玻片，用多聚赖氨酸包被的12孔培养板，培养24h后换无血清培养液.实验分为5组，Ⅰ组为正常

5、对照组;Ⅱ组为A/R组，给予等量磷酸盐缓冲液（PBS）;Ⅲ，Ⅳ和Ⅴ组为bFGF干预组，A/R前分别在无血清培养液中加入不同浓度（10，20及40μgL-1）的bFGF.用无血清培养基孵育12h以后，A/R组及Ⅲ，Ⅳ，Ⅴ组，同时移至0.2m2的恒温（37℃）密闭容器内，连续充以无氧气体（900mLL-1N2，100mLL-1CO2），流速为200mLmin-1，6h后取出，再置含900mLL-1空气，100mLL-1CO2的培养箱内复氧12h.Ⅰ组，培养板持续置于孵箱内培育.实验结束后，细胞用40gL-1多聚甲醛固定，抗Bc1-2抗血清按1200倍

6、稀释，按ABC法对各组细胞进行免疫组化染色，用Ni-DAB葡萄糖氧化酶系统显色，光镜下棕黄色为Bc1-2阳性细胞.100倍光镜下计数30个相邻视野中Bc1-2免疫反应阳性细胞（棕黄色为Bc1-2阳性细胞）占总细胞数百分比，并作显微照相，在CMIAS图像分析仪上用吸光度组件对Bc1-2免疫反应阳性细胞作平均吸光度的色谱分析.统计学处理:实验数据用Excel软件处理，实验结果以x±s表示，组间差异用t检验.2结果Ⅰ组肌细胞对Bc1-2有一定表达（Fig1），Ⅱ组肌细胞表达很低（Fig2），而经bFGF预处理的A/R后的肌细胞Bc1-2免疫反应增强（F

7、ig3，4）.图1－图4略2.1bFGF对A/R后Bc1┐2阳性肌细胞百分比的影响Ⅰ组的肌细胞Bc1-2阳性的百分比为（23.3±4.2）%;Ⅱ组的肌细胞Bc1-2阳性的百分比为（14.3±3.3）%（与Ⅰ组比P0.01）;Ⅲ，Ⅳ和Ⅴ组的肌细胞Bc1-2阳性的百分比分别为（23.6±5.9）%（与Ⅱ组比P0.01），（34.7±5.8）%（与Ⅲ组比P0.01），（40.8±4.2）%（与Ⅳ组比P0.05）.2.2bFGF对A/R后Bc1┐2阳性肌细胞平均吸光度的影响Ⅰ组肌细胞对Bc1-2有一定表达（Fig1），A/R组肌细胞表达很低（Fig2），

8、而经bFGF预处理的A/R后的肌细胞Bc1-2免疫反应增强（Fig3，4）.Ⅰ组的肌细胞平均吸光度为0.13±0.05;Ⅱ组的肌细胞平均