荔枝果皮中根皮苷的提取、纯化、鉴定以及根皮素的人体美白功效评价

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1、中山大学硕士学位论文荔枝果皮中根皮苷的提取、纯化、鉴定以及根皮素的人体美白功效评价姓名：谢阳申请学位级别：硕士专业：皮肤病与性病学指导教师：赖维20090520中山土学硕士学位论文摘要荔枝果皮中根皮苷的提取，纯化、鉴定以及根皮素的人体美白功效评价专业：皮肤病与性病学学位申请人：谢阳指导老师：赖维教授摘要具有美白功效的化妆品是目前最受欢迎的化妆品之一，尤其在亚洲地区，采用天然美白成分的产品最受人们的推崇。根皮素是国内外新近研究开发的新型美白剂和抗氧化剂，属于黄酮类物质中的二氢查耳酮，据文献报道，在植物中根皮素多以糖苷的形式存在。根皮素和根皮苷在自然界中分布较少，主要存在于苹果、

2、梨等植物的根茎和根皮。荔枝是中国岭南地区盛产的特色水果，而且深受人们喜爱。既往对荔枝果皮的研究发现，荔枝皮提取物有很强的抗氧化活性，其抗氧化成分中含有黄酮类物质。由此推测，荔枝果皮中可能含有根皮苷。如能从荔枝果皮中提取和分离根皮苷，作为一种具有美白和抗衰老活性的天然原料应用于化妆品中，不仅来源广泛，而且变废为宝，可以带来巨大的社会经济效益。目前，国内外在天然植物中提取根皮苷的方法主要是有机溶剂提取法、超声波浸提法、微波辅助法，分离纯化主要用高效液相色谱法、硅胶柱层析法和薄层层析法，鉴定的手段为紫外分光光度法、质谱法和核磁共振法。其中，有机溶剂提取法、超声波浸提法、高效液相色谱

3、法、质谱法和核磁共振法效率较高，是适用于实验室操作的成熟技术。●山文学硕士学位论文摘要美白剂功效评价的方法有以下几种：酪氨酸酶活性测定、细胞内黑色素含量测定、人体皮肤试验法。人体皮肤试验法是最直接有效的评价方法，以往的试验大多数是将美白剂涂抹在病变皮肤上，一段时间后以肉眼观察和仪器检测祛斑效果。由于人体皮肤色斑类型繁多、成因复杂，个体差异极大，试验存在许多不可控制的影响因素。因此，目前国际上常用具有良好均一性和重现性的人工紫外线诱导正常皮肤黑斑的方法作为人体皮肤美白功效试验的模型。文献中诱导黑斑的的紫外线，通常选择中波紫外线(UvB，波段290．320rim)，或者是连续波长

4、紫外线(删rA+UVB，波段290．400rim)。但近年来一些研究显示，同样剂量的长波紫外线(UvA，波段320．400rim)比UVB诱导的黑斑更加持久，红斑反应却比UVB轻微，提示了选择UVA作为诱导黑斑模型的紫外线波段可能是更加有效和安全的方法。对于皮肤颜色变化的判定，近年来国外普遍使用国际照明委员会(CIE)规定的色度系统(L·a％木色度系统)测量皮肤颜色的变化，以及皮肤黑色素和血红素测试仪测量皮肤黑色素的含量两种方法。L聿a％宰色度系统中L值表示皮肤的亮度，数值越大皮肤越亮；a值表示皮肤的红绿色度，数值越大皮肤越偏向红色；b值表示皮肤蓝黄色度，数值越大皮肤越偏向黄

5、色。皮肤色度角(IndividualTypologyAngle，ITA。)是由L值和b值计算出来的色度角，分为I～Ⅵ级，也是表示皮肤颜色深浅的一个较综合的指标。黑色素和血红素测试仪测量皮肤的黑色素指数和血红素指数，分别表示皮肤中的黑色素含量和血红素含量。目前关于根皮素的美白功效研究结果显示，体外酪氨酸酶活性实验中根皮素能竞争性抑制酪氨酸酶活性，并呈剂量依赖，其抑制率优于目前许多美白产品中使用的熊果苷和曲酸。细胞水平的研究也发现，小鼠B16细胞和人上皮黑素细胞培养基中加入根皮素后，其酪氨酸酶活性、黑色素含量都较对照组低。但是迄今为止国内外尚没有评价根皮素美白功效的人体皮肤试验的

6、研究报道。本研究首次成功地从我国岭南特色水果荔枝的果皮中提取和纯化根皮苷单体，首次使用UVA诱导的人体正常皮肤黑斑模型以及首次验证了根皮素具有人体皮肤美白的功效。从而有助于根皮素进一步的临床应用以及我国化妆品产业的发展。2中山大学硕士学位论文摘要方法：1．荔枝果皮中根皮苷的提取、纯化和鉴定·运用70％乙醇溶液浸泡法以及超声波辅助法提取荔枝果皮中的根皮苷。·运用D101大孔树脂吸附分离法、固相萃取法和高效液相色谱法纯化提取液中的根皮苷单体。·运用质谱法对纯化的根皮苷单体进行结构鉴定。2．UVA诱导的人体皮肤黑斑模型·受试者选择：按照试验设计纳入20名健康志愿者，详细告知试验目的

7、、内容及流程等以及试验中可能出现的不良反应，受试者以自愿为原则签署知情同意书后进入本试验。试验方案已经过过中山大学附属三院伦理委员会批准。·UVA剂量与方法：照射部位为非曝光性的大腿内侧。测量受试者的MED后，用1MED剂量的UVA照射受试部位，每天一次，连续照射3天。·皮肤颜色的测量：使用CIE规定的色度系统(L·a铀幸色度系统)测量皮肤颜色的变化，以及皮肤黑色素和血红素测试仪测量皮肤黑色素含量和血红素含量。观察时间为8周。3．根皮素的人体美白功效评价·受试者选择：按照试验设计纳入20名健康志愿者，详