serpina亚群在情志型阴虚“上火”候证中表达及意义

《serpina亚群在情志型阴虚“上火”候证中表达及意义》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、SERPINA亚群在情志型阴虚“上火”候证中表达及意义浙江大学医学院细胞牛.物研究所310058目的探究丝氨酸蛋白酶抑制剂（Serpina）亚群在情志阴虚“上火”候证中的表达水平及意义。方法以ipT3（三碘甲状腺原氨酸）并叠加U腔牙龈炎模型建立情志型阴虚“上火”大鼠模型组，探究大鼠脏器变化及脏器指数，以iTRAQ-2DLC-MS/MS技术鉴定分析大鼠血清差异性蛋白。结果模型组大鼠体态消瘦、体重减较；脾、肾上腺重量增加，胸腺退缩。肝、脾、肾上腺脏器指数大于生理盐水组，胸腺指数明显小于生理盐水对照组。模型组血清Serpindn、Serpin2c（M/C11.2

2、7）；SerpinalCM/C7.05）；Serpina3LSpin2a（M/C3.84）;SerpinalO、Raspl,Zpi（M/C3.13）表达上调。结论模型组大鼠脾、肾上腺重量增加，胸腺退缩，表明情志型阴虚“上火”是免疫紊乱的候证；Serpinal、Serpina3、Serpin3n亚基的表达上调，进一步表明情志型阴虚“上火”是免疫紊乱（免疫过度与免疫失活）并伴有炎症、TNF-α介导的细胞死亡特征的阴虚候证。Serpin亚群在情志阴虚“上火”表达也为情志阴虚“上火”候证诊断与治疗提供了蛋白组靶位牛.物学依据。【关键词】情志；阴虚“上火

3、”；免疫；Serpin亚群［］R432.2［］A［］1672-5018（2016）04-111-02以ipT3（三碘甲状腺原氨酸）处理SD大鼠建立情志阴虚模型，并在此基础上叠加U腔牙龈炎“上火”模型建立情志型阴虚“上火”SD大鼠模型组。微观辨证模型大鼠体征及脏器特征。用iTRAQ-2DLC-MS/MS蛋白组学技术与牛.物学信息分析手段探究Serpina（丝氨酸蛋白酶抑制剂）家族在情志型阴虚“上火”证候中的表达及意义。1.材料与方法1.1材料三碘甲状腺原氨酸（T3）,北京百灵威科技有限公司，批号：L840O63；牙髓卟啉单胞菌冷冻干菌粉，广东省微生物菌种保藏

4、中心批号：201505；戊巴比妥钠，中国医药上海化学试剂公司（进U分装），批号：020402;SPF级雌性SD啉单胞菌冷冻干菌粉，广东省微生物菌种保藏中心批号：201505；戊巴比妥钠，中国医药上海化学试剂公司（进U分装），批号：020402;SPF级雌性SD大鼠，50只（浙江省医科院实验动物中心提供，生产批准文号:SCXK（浙）2014-0001;PL203电子天平，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司;LCMS-8030、TripleQuadrupoleMS/MS，日本岛津制作所。1.2方法1.2.1动物分组及处理本实验受浙江大学动物伦理委员会批准。取5

5、〜6周龄，体重220〜240gSPF级雌性SD大鼠50只。称重，随机分成模型组、生理盐水组2组，每组25只。第2天根据设定开始分别药与0.9%NaCI2o模型组每天下午4点ipT3500g/kg/d（50g%，0.2ml/100g）、生理盐水组分别ipO.9%NaCI2,（0.2ml/kg/d）。连续给药ipT36天。模型组给药第3天以丝线结扎下门齿，滴注牙髓卟啉单胞菌，叠加口腔牙龈炎模型，第7天，2%戊巴比妥钠（0.2ml/100g）ip麻醉，颈中动脉插管取血采样。1.2.2血清样本制备取2%戊巴比妥钠（0.2ml/100g）ip麻醉，颈中动脉插管取血，

6、将血分别置于真空血清采血管，室温静置2小吋，3000rbm/10min离心，提取血清，分装后，置于-80°C备用。1.2.3脏器样本处理动物颈椎脱臼处死后，用外科剪迅速打开腹腔取出胸腺、肝脏、脾脏、肾上腺，滤纸吸去血液，修除脂肪与系膜，千分之一电子天平称取其湿重，计算脏器指数。脏器指数公式：脏器指数=（脏器重量/大鼠体重）×100o1.2.4牙龈炎建模[1]取牙髓卟啉单胞菌冷冻干菌粉，接种于3ml厌氧培养液，37°C厌氧盒培养复苏5天，分别提取lml细菌培养液，分别置于3ml培养液的3试管，37°C厌氧盒培养3天。提取细菌培养液用无菌pbs(p

7、H7.2)稀释至近似3×108/ml置于厌氧培养箱，放入冰箱4°C备用。取大鼠，2%戊巴比妥钠(0.2ml/100g)ip麻醉，丝线结扎下门齿，剥离部分牙龈，滴注牙髓卟啉单胞菌200μl/次/天。1.2.5iTRAQ-2DLC-MS/MS蛋白组学技术筛选与生物信息学分析iTRAQ-2DLC-MS/MS筛选鉴定分析血清差异性；GO、KEGG聚类分析血清差异性蛋白性质。iTRAQ标记按照iTRAQ试剂盒(AppliedBiosystems,Fostercity,CA,USA)说明书进行操作。蛋白质加入预冷的丙酮，-20摄氏度度沉淀1小吋。12

8、000rpm离心15分钟，弃上清，用试剂盒中自带的溶解液disso