辣椒_9704a_雄性不育特异基因hsf的克隆及表达分析

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1、湖南农业大学学报(自然科学版)2014年6月第40卷第3期JournalofHunanAgriculturalUniversity(NaturalSciences),Jun.2014,40(3):257–261DOI:10.13331/j.cnki.jhau.2014.03.007投稿网址：http://www.hunau.net/qks辣椒‘9704A’雄性不育特异基因hsf的克隆及表达分析1112*1*胡双发，彭彦，赵燕，刘峰，张学文(1.湖南农业大学生物科学技术学院，湖南长沙410128；2.湖南省农业科学院蔬菜研究所，湖南长沙410125)摘要：对辣椒细胞质雄性不育系‘9704A’

2、和其同核保持系‘9704B’早期花蕾转录组的Solexa测序结果进行分析，发现1个差异性表达基因，其在不育系中的表达比在保持系中的表达高10倍，该基因与番茄、葡萄、拟南芥中的hsf基因同源性分别为87%、73%和70%，推测该基因为辣椒的hsf基因。根据该基因序列设计引物，从辣椒‘9704A’中克隆该基因的全长及核心cDNA序列，克隆到的hsf全长与核心序列与转录组测序获得的序列一致，进一步分析表明，该基因属于hsf基因家族成员。用定量PCR分析hsf基因在‘9704A’和‘9704B’2种辣椒的根、茎、叶和晚期花蕾中的表达情况，结果表明，该基因在不育系叶组织的表达量为其在保持系叶组织表达

3、量的13.7倍，在不育系晚期花蕾中的表达量也为其在保持系晚期花蕾的3倍，而在2种辣椒系的茎中的表达量都很低，在2种辣椒系的根中的表达量均较高。关键词：辣椒；雄性不育；热激转录因子；定量分析中图分类号：S641.3；Q781文献标志码：A文章编号：1007−1032(2014)03−0257−05CloningandexpressionanalysisofaCMSspecifichsfinCapsicumannuumL.‘9704A’1112*1*HUShuang-fa，PENGYan，ZHAOYan，LIUFeng，ZHANGXue-wen(1.CollegeofBioscienceand

4、Biotechnology,HunanAgriculturalUniversity,Changsha410128,China;2.InstituteofVegetables,HunanAcademyofAgriculturalSciences,Changsha410125,China)Abstract:TranscriptomSolexasequencingwasconductedonpepperearlyflowerbudsoftheCMSline‘9704A’anditscorrespondencehomonuclearmaintainerline‘9704B’previously.A

5、genethatexpressed10timeshigherinpeppercytoplasmmalesterile(CMS)line‘9704A’thanitisinthemaintainerline‘9704B’wasidentified.Genehomologyanalysisoftheclonedhsfgeneshowedthatthegeneshares87%homologywiththehsfinSolanumlycopersicum,73%inVitisviniferaand70%inArabidopsisthaliana.Accordingtothegenesequence

6、wedesignedtheprimersandclonedthecoresequenceandhsfcDNAinpepper‘9704A’.SequenceanalysisshowedthattheclonedhsfcDNAwasconsistentwithtranscriptomSolexasequencing.Geneanalysisshowedthatthegeneisoneoftheplantshsfgenefamilymembers.Thereal-timefluorescencequantitativeRT-PCRprimersweredesignedandtheRT-PCRo

7、fthegenewascarriedoutwiththecomparedtissuesin‘9704A’and‘9704B’,usingactinasreferencegene.Theresultshowedthatthehsfgeneexpressionin‘9704A’leafis13timeshigherthanitisinthemaintainerlineandin‘9704A’laterflowerbudis3