甜菜细胞质雄性不育相关基因的克隆及表达分析

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1、４５１０１２９．４１学分类号巧校巧码＂＂２０１２２０２００９ＵＤＣ巧１．１学号赛本蓉嗦乂攀硕±学位论文？？－－甜菜细胞质雖性不巧相关基因的克造及表达分巧ｉ：＇＇？．、—．．．－、ｉｎａｎｄＥｒｒｅｓｓｉｏ凸ｏｆＧｅ凸ｅｓＲｅｌａ化ｄｔｏＣｙｔｏｐｌａｓｍｉｃＣｌｏｎｇｐ；、ＭａｌｅＳｔｅｒｉｌｉｔｉｎＳｕａｒＢｅｅｙｇ？．ｋ＇一‘，■■Ｖ．１．申请人：乌日汉＇＇学科口类：理学為学科专业：復物

2、学－Ｉ研究方向：植物发育生理Ｖ，人＇‘：％＇指导教师：ａＷ＾教授？ｌ：芭＞；＇■■－史树德則教授：：；．－．、＜１．Ｉ．．‘．．■醉４．－－、；＊亡ｒ‘：．、４■论文提交日期—五年六月：二〇电、？—？．？－ｉ内蒙古农业大学研究生学位论文独创声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加！＾标注和致谢的地方外，也不包，论文中不包括巧他

3、人己经发表或撰写过的研究成巧括为获得我校或其他教巧机构的学位或证书而使用过的材料，与我问Ｘ作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并裴示谢意。？。中请学位论文与资料若有不实之处，本人承担切相关责任日期：長、心－ＬＰ论文作者签名：内蒙古农业大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解内蒙古农业大学有关保护知识产权的规定，即；切ｆ究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属内蒙古农业火学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为内蒙古农业大学，且导师为通

4、讯作者，通讯作者单位亦署名为内蒙古农业大学。学校有权保留并向圈家有关部口或机构送交论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅。学校可１＾公布学位论义的全部或部。分内容），采用影印、缩印或其他手段保存论义（保密内容陈外论文作者签名：指导獅签名：４猶裳瓜６〇日期：、１摘要为探索甜菜ＣＭＳ的分子机理，提高ＣＭＳ在甜菜杂种优势上的利用效率，本研究［＾１甜菜细胞质雄怯不育系及其保持系为材料，基于公共数据库（ＧｅｎＢａｉｉｋ）中发表的相关帮菜基因组ＤＮＡ序列，并参考其它作物ＣＭＳ相关基

5、因序列，采用同源序列克隆法＞，扩增了甜菜体内邸６、口４、ｃｏｘ／、ｃｏｘ／／７＾＞取、〇听５、〇诉２＾和〇听２９七个与ＣＭＳ性巧可能相关的基因或片段序列，通过生物信息学和比较基因组学等分析方法，分析了这些ＤＮＡ序列在甜菜细胞质雄性不育系及其保持系间的差异，并推测！＾＾上基因或片段的氨基酸结构特点；同时利用半定量ＰＣＲ和实时巧光定量ＰＣＲ技术，对不育系和相应保持系在花蕾发育阶段的上述相关基因和片段的表达量差异迸行了比较分析，主要研究结果如下：１．在ｍｔＤＮＡ水平上，卿６和０诉２９基因片段在细胞

6、质雄性不育系与其相应保持系中均没有扩增出目的条带０；诉基因片段只在细胞质雄性不育系中扩増出目的条带，而在相应保持系中未能扩增出目的条带，说明该基因片段可能是引起甜菜细胞质雄性不育的主要候选基因之一〇；取４、ｃｍ／、ｃａｒ／７和０听Ｓ７基因片段在两系中扩增出的目的条带均表现出明显差异。２．口４取、ｃｍ／、〇听５７和〇诉別等４个基因片段在细胞质雄性不育系及其相应保持系時的差异条带基因序列比较，结果表明！与保持系相比，不育系核巧酸序列多化发生了碱基的插入、缺失及突变的变化。编码的氯基酸序列也相应

7、地发生了改变。３？利用半定量ＰＣＲ和实时荣光定量ＰＣＲ技术，对差异基因在甜菜花蕾３个发育时期进斤表达分析，结果表明：与相应保持系相比，细胞质雄性不育系ａ取４基因片段在小花蕾和中花蕾中表达量显著低于保持系．，而大花蕾中衰达量无明显差异ＣＯＸ／Ｊ基因片段在整个花蕾发育时期，其表达量均显著低于保持系．０Ｓ７基因片段听在小花蕾中表达量显著高于保持系，具上调表达趋势。而在中花蕾和大花蕾中表达量显著低于保持系，并下调表达；０诉２４基因片段在不育系中表达量丰富，并随着花蕾发育，先上调表达。，后下调

8、表达．关键词：甜菜；细胞质雄性不育；线粒体基因；基因克隆；半定量ＰＣ民实时英光定量ＰＣ艮ＣｌｏｎｉｎｇａｎｄＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＧｅｎｅｓ民ｅｌａｔｅｄＵ）ＣｙｔｏｐｌａｓｍｉｃＭａｌｅＳｔｅｒｉｌｉｔｙｉｎＳｕｇａｒｂｅｅｔＡｂｓｔｒａｃｔＩｎｏｒｄｅｒｔｏｔｅ巧ｍｏｌｅｃｕｌ