脐孢木霉菌trichodermabrevi_省略_m0248tri5基因片段的克

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1、29(4)555-560中国生物防治学报ChineseJournalofBiologicalControl2013年11月脐孢木霉菌Trichodermabrevicompactum0248tri5基因片段的克隆及表达分析*詹晓奂，申屠旭萍，刘卫平，马正，俞晓平（中国计量学院生命科学学院/浙江省生物计量及检验检疫技术重点实验室，杭州310018）摘要:脐孢木霉菌Trichodermabrevicompactum能合成木霉素等单端孢霉烯类化合物，而基因tri5编码的单端孢霉二烯合酶是合成途径中的关键酶，它催

2、化反式法呢基焦磷酸（tFPP）合成单端孢霉二烯。为分析基因tri5与木霉素合成的关系，本研究从脐孢木霉菌0248中克隆了基因tri5片段，并运用实时荧光定量PCR技术分析了基因tri5在不产木霉素培养基和产木霉素培养基中的差异表达。在相同培养时间下，基因tri5在不同产木霉素状态间的表达量差异显著；在培养96h时基因tri5在2种培养基中均达到最大值，基因tri5在产木霉素状态下的表达量是不产木霉素状态下的107.18倍。通过检测产木霉素培养基中基因tri5表达量与木霉素含量的变化，结果显示木霉素的含量随

3、着基因tri5表达量的增加而不断增加，在培养96h时达到1最大值118.71mgL，推测基因tri5表达量与木霉素合成相关。该研究为基因tri5功能的进一步研究和对脐孢木霉菌0248进行基因工程菌改造奠定了理论基础。关键词：脐孢木霉菌；基因tri5；木霉素；基因克隆；实时荧光定量PCR中图分类号：S476；Q344.13文献标识码：A文章编号：1005-9261(2013)04-0555-06CloningandExpressionAnalysisoftri5GeneFragmentfromTrich

4、odermabrevicompactum0248*ZHANXiaohuan,SHENTUXuping,LIUWeiping,MAZheng,YUXiaoping（ZhejiangProvinceKeyLaboratoryofBiometrologyandInspectionandQuarantine/CollegeofLifeScience,ChinaJiliangUniversity,Hangzhou310018,China）Abstract:ThefilamentousfungusTrichoderm

5、abrevicompactumwasprovedtoproducethetrichodermin,oneoftrichothecenes.Trichodienesynthase,whichisencodedbythegenetri5,catalysestheconversionoffarnesylpyrophosphatetotrichodieneinFusariumspp.andisthekeyenzymeintrichothecenesbiosynthesis.However,thebiosynthe

6、ticpathwayfortrichothecenemetabolismiskeepingunclearinT.brevicompactum.Inordertounderstandthefunctionsofgenetri5clonedfromT.brevicompactum0248,whichwasisolatedfromgarlicAlliumsativuminourpreviouswork,therelativeexpressionlevelsofthisgeneintwodifferentcult

7、uralmediawereevaluatedbythereal-timequantitativePCR.Theresultsshowedthatsignificantlydifferentexpressionofgenetri5occurredintrichoderminproducingandnon-producingmedia.Therelativeexpressionlevelofgenetri5inthetrichoderminproducingmediumwas107.18timeshigher

8、thanthatinnon-producingmediumafter96hoursincubation,andtheproductionoftrichoderminwasenhancedwiththeincreasingexpressionlevelofgenetri5,whichreachedtothe1maximumof118.71mgL.Theresultsindicatedthattri5genemayhaveac