水稻病毒快速检测技术

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1、水稻病毒快速检测技术浙江大学生物技术研究所：吴建祥浙江杭州2014年6月11日危害我国水稻的主要病毒：南方水稻黑条矮缩病毒(SRBSDV),其传毒介体为白背飞虱水稻黑条矮缩病毒（RBSDV),其传毒介体为灰飞虱水稻条纹病毒（RSV),其传毒介体为灰飞虱水稻锯齿矮缩病毒（RRSV),其传毒介体为褐飞虱南方水稻黑条矮缩病毒（SRBSDV）2001年首次在广东阳西发现2008年扩散至长江流域2009年局部地区暴发成灾：越南19省我国9省约600万亩受害2010年发病面积进一步扩大：我国南部13个省区发病

2、严重，超过500万亩中稻、2000万亩晚稻受害2011、2012年湖南、江西、浙江、福建等地几乎看不到田间发病，但在贵州、广西、云南等地区局部发生，尤其在贵州的贵定县、荔波县、广西的兴安县、云南的施甸县等地爆发成灾2013年在海南、云南、广东、浙江、广西、湖南、江西等省份的局部地区的晚稻和单季稻上发病，尤其在广东晚稻上流行。并在山东、安徽和江苏的水稻上检测到SRBSDV，说明SRBSDV在我国的发生范围有向北扩散的趋势。2013年病情调查华南地区早稻后期感病率偏高粤北、湘南及赣南中稻发生偏重晚稻发病总体偏轻粤

3、北中稻重病田病丛率80%左右湘南中稻收割后田间残存病株SRBSDV病害症状周国辉教授提供南方水稻黑条矮缩病毒(SRBSDV)C典型症状：矮缩、叶尖卷曲、倒生气须根、瘤状突起SRBSDV引起的玉米粗缩病（2012年3月云南施甸县）SRBSDV在中国的分布图黑龙江吉林新疆辽宁甘肃内蒙古北京宁河北夏青海山西山东陕西河南江苏西藏安徽上海四川湖北重庆浙江江西湖南贵州福建云南台广西广东湾海南SRBSDV分类地位呼肠孤病毒科（Reoviridae）斐济病毒属（Fijivirus）寄主范围：SRBSDV可侵染水稻、玉米、高粱、蕙

4、米、稗草、白草、水莎草、野燕麦、马唐草和牛筋草等多种禾本科作物和杂草。SRBSDV传毒介体：白背飞虱白背飞虱是典型的迁飞昆虫传毒介体：白背飞虱1990年代以后，杂交水稻种植面积的大幅度增加和吡虫啉的大范围高强度施用，使白背飞虱逐渐取代褐飞虱而成为优势种群。白背飞虱高效传毒：水稻病株上扩繁的二代高龄若虫，可80%带毒白背飞虱在我国的大多数水稻产区不能越冬，因为白背飞虱不能在气温低于10℃的地方越冬越冬地：海南、云南西南部、两广南端、越南、缅甸白背飞虱携毒远距离迁飞……………………………………………………………………

5、………………………………………..…………………………………………..….….……………………………………………………………………..……………………….………….…..……….…..….……….……..….…...…..….……..…..….…..…………..……………………………..………..…....…....周国辉教授提供中、晚稻主要染病过程成灾入侵为害扩散初显周国辉教授提供中、晚稻重病田形成过程秧针期飞虱带毒入侵并产卵秧田后期下代飞虱带毒扩散重病田形成本田期1~2次再扩散周国辉教授提供南方水稻黑条矮缩病

6、病害循环病毒在冬种水稻、玉米及杂草上越冬白背飞虱带毒南回白背飞虱取食获毒虫源地带毒白背飞虱随气流中、晚稻严重发病远距离迁飞(春季由南向北)白背飞虱取食迁入地早稻、带毒白背飞虱再迁飞及玉米及杂草传毒扩繁短距离转移带毒白背飞虱侵入中、晚稻秧田或初期本田，传毒、产卵、扩繁第二代若成虫南方水稻黑条矮缩病发病特点1)病害发生难预测2)中、晚稻病重于早稻3)杂交稻病重于常规稻4)田块间病情差异明显5)地区间病情差异大，同一地区年度间病情差异大6)轻病田病株零星分布，重病田病株集团分布南方水稻黑条矮缩病防控中存在的最大问题预测

7、预报问题发生趋势,发生程度,发生地点,为害程度精确越冬区不明越冬和早春虫量及其带毒率监测系统不完善迁飞带毒虫精确降落点及降落时间可变性大早稻虫量及发病率调查技术要求高、数据缺失白背飞虱增殖测报有难度防控指导思想建立预警监测平台，适地适时用药科学防控，杜绝滥用农药联防联控，适度防控培育抗病品种，开发新的防控措施白背飞虱带毒率的快速检测是该病毒病的预测预警及建立其科学防控体系的关键水稻病毒的主要检测方法病株症状观察，但前期感染水稻无典型症状特征，且无法观察稻飞虱是否带毒；电镜观察；RT-PCR和qRT-PCR方

8、法核酸检测方法：核酸杂交和测序；高通量的血清学方法：ELISA(dot-ELISA、ACP-ELISA、DAS-ELISA、TAS-ELISA)、免疫胶体金试纸条；血清学检测方法关键是获得高特异性、高灵敏度的病毒抗体水稻黑条矮缩病毒（RBSDV）呼肠孤病毒科(Reoviridae)斐济病毒属（Fijivirus)二十面体球状结构约75nm双链RNA(dsRN