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1、针对SRBSDV水稻病毒的ELISA检测方法水稻病毒的主要检测方法：病株症状观察:但前期感染水稻无典型症状特征，且无法观察稻飞虱是否带病毒；电镜观察；RT-PCR和qRT-PCR方法；核酸检测方法：核算杂交和测序；高通量的血清方法：ELISA(dot-ELISA、ACP-ELISA、DAS-ELISA、TAS-ELISA)、免疫胶体金试纸条；血清学检测方法关键是获得高特异性、高灵敏度的病毒抗体ELISA基本原理：把具有免疫活性的免疫蛋白(抗原或抗体)结合到某种固相载体表面。使该免疫蛋白与某种特异性的酶连接成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原或抗体在检测中由于未经过其他任何处理,
2、所以既有免疫活性,同时又保留其酶的活性。在试验时,把受检样品(待测的抗原或抗体)与酶标抗原或抗体按不同的步骤在固相载体表面起反应。然后用缓冲液洗漆,使固相载体上的抗原抗体复合物与其他物质分开。在一定范围内,结合在固相载体上的酶量与样品中受检物质的量成一定的比例关系。加入酶反应的底物后,底物被酶催化变为有色产物,因为产物的量与样品中受检物质的量直接相关,故可根据反应物颜色的深浅进行定性或定量分析。由于酶是一种生物催化剂,催化效率很高,故可极大地放大反应效果,从而使测定方法达到很高的灵敏度。dot-ELISA实验方法：一、材料：具有典型矮缩症状和条纹叶枯症状的水稻植株采自田间
3、水稻植株上的白背飞風材料，暂时浸泡在无水乙醇中备用。二、抗原：用感染RBSDV的玉米病叶的粗提液作为免疫抗原合成SRBSDVCP蛋白的多肽与牛血清白蛋白交联成免疫抗原上述2种制备的抗原分别免疫BALB/C小鼠，分别制备RBSDV、SRBSDV的单抗。三、试剂：(1)磷酸盐缓冲液(10xPBS,PH7.4):80gNaCl,2gKCl,1.44gHP,2.4gKP,溶于800mL蒸馏水后,定容至1000mL;(2)包被液(0.05mol/L碳酸盐缓冲液,pH9.6):1.59g,2.93gNaHC,溶于800mL蒸馏水中后,定容至1000mL;(3)封闭液:a、称取5g脱脂
4、奶粉溶于100mLPBS-T;b、称取0.2g牛血清蛋白(BSA)溶于100mLPBS-T;(4)抗体稀释液(ELISA缓冲液):称取1g脱脂奶粉,2gPVP(polyvinyl-pyrrolidone,分子量为40000)溶于100mLPBS-T;(5)洗漆缓冲液(PBS-T):取100mL10xPBS,加入0.5mLTween-20,定容至1000mL;(6)底物:p-NPP(p-nitrophenyphosphate)(7)底物缓冲液:97mL二乙醇胺(diethanolamine),0.1gMg,溶于800mL蒸馆水中,用浓盐酸调PH至9.8,最后定容至1000m
5、L四、仪器设备：酶标仪(Bio-rad产品);移液枪、小型台式离心机、振荡器、(Eppendorf产品);-80超低温冰(THERMO产品);以及叶片汁液提取仪、洗板机、振荡仪、超净工作台、高压灭菌锅、水浴锅、4冰箱、恒
