基于微流控芯片技术的植物病毒快速检测

《基于微流控芯片技术的植物病毒快速检测》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、万方数据独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得新疆农业大学或其他教育单位的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：时间：制汐年多月侈I!I关于学位论文使用授权的说明本人完全了解新疆农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：新疆农业大学有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文，允许论文被查阅

2、和借阅。本人授权新疆农业大学将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以公布(包括刊登)论文的全部或部分内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生签名：刷醛轹愀，‘，r，1旷℃N时间：渺／驴年Z月侈日时间：豳烨年f月∥日万方数据基于微流控芯片技术的植物病毒快速检测摘要微流控芯片技术是微全分析系统研究领域的重要组成部分，其最终目的是将生物、化学、医学等领域中所涉及的细胞培养、分选、裂解、样品制各、核酸提取、反应、分离、检测等常规实验室的各种操作单元集成到一块芯片上，实现“样品进入．结果输出”的目标。本文在该理念下将这一技术用丁．植物病毒检测的研究中，具体工作如下：1

3、．针对选择的研究对象设计并筛选引物。根据前人研究结果，目前微流控芯片上进行的芯片PCR的温度控制尚未达到常规PCR仪所具有的精确度和稳定性，加之退火温度在最佳Tm值的上下小范围内，就可以保证目的基因的成功扩增，因此对引物的特异性、稳定性方面要求较高．本文就番茄黄化曲叶病毒(Tomatoyellow彪矿curlvirus，TYLCV)和烟草花叶病毒(Tobaccomosaicvirus，TMV)分别设计、筛选、验证引物，分别获得14对和8对备用引物，为植物病毒微流控芯片PCR扩增及其与芯片电泳的集成检测研究奠定基础。2．优化微流控芯片电泳条件，并将琼脂糖凝胶电泳和微流控芯片电泳进行比

4、较．运用控制变量法，对微流控芯片电泳具有重要影响的参数进行优化，得到聚甲基丙烯酸甲酯(PolymethyIMethacrylate，PMMA)芯片对应的分离胶的最佳配比为9901xL[3×TTE+3％(PVP70％+HEC30％)]+10pL(100×SYTOXOrangedye)，最佳进样电压、分离电压分别为400V和700V，进样时间为30s。微流控芯片电泳较琼脂糖凝胶电泳在检测时间上至少减少10倍；试剂消耗为后者的l／8，降至到llaL之内；灵敏度较后者至少高出103倍，可准确检测到5×10’6¨∥此，有望在作物病毒病显症之前发挥筛查和预防方面的巨大作用。3．微流控芯片对植物

5、病毒的集成检测．把微流控芯片PCR和微流控芯片电泳在同一玻璃芯片上进行，实现了植物病毒的核酸PCR过程与随后产物电泳检测的集成，在提高检测灵敏度的同时，进一步缩短检测时间，减少了人工操作，避免因样品转移带来的污染，推动植物病毒检测走向集成化、自动化操作。关键词：微流控芯片：TYLCV；TMV；引物筛选；微流控芯片电泳；微流控芯片PCR．电泳万方数据DetectionofPlantVirusesBasedonMicrofluidicChipTechnologyAbstractMicrofluidicsanalysisisanimportantpartofmicro．tatalanal

6、ysissystem．Theultimateaimiscombiningvariousoperatingunitsofroutinelaboratoryofbiology,chemistryandmedicineintoasinglechip，suchascellculture，sorting，cracking，samplepreparation，nucleicacidextraction，reaction，separation，achieveingthe“sampleenter．resultoutput'’．Inthispaper，twoplantvirusesweredetec

7、tedbasedonaboveidea．SpecificworkiSdescribedasfollows．First，wedesignedandscreenedprimersbasedontheselectedviruses．Thetemperaturecontrolinchip—PCRofmicrofluidicshasnotyetreachedtheaccuracyofconventionalPCRinstrumentaccordingtotheformerres