肺癌和大肠癌早期筛查自身抗体标志群的筛选

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1、肺癌和大肠癌早期筛查自身抗体标志群的筛选摘要目的：恶性肿瘤是严重威胁人类生命和健康的疾病。恶性肿瘤的治疗方式以手术治疗为主，而尽早诊断并进行根治性手术是避免肿瘤转移，延长恶性肿瘤患者生存时间，提高五年生存率的关键。对高危人群进行定期筛查是实现病人早期诊断的重要策略。目前肺癌和大肠癌缺乏有效的血清学筛查方法，探索肺癌和大肠癌的有效早期筛查方法显得尤为重要。方法：(1)用30例肺癌患者血清对前期从肺癌肽库中应用混合血清筛选出的22个噬菌体肽进行ELISA反应，从中挑选出与肺癌血清反应性高的克隆，再应用90例肺癌血清和90例对照血清验证挑选出的噬菌体肽诊断肺癌的能力，

2、构建肺癌早期筛查血清标志群。对其中一个噬菌体肽所比对的蛋白在组织中的表达应用组织芯片进行免疫组化分析。(2)选取30例大肠癌组织标本构建17噬菌体展示肽库；结合protein-A／G的琼脂糖珠分别富集大肠癌组及非肿瘤对照组血浆中的IgG进行5轮亲和筛选，富集大肠癌相关肽；随机挑取5轮筛选后的2000个噬菌体克隆，用ELISA方法初步筛选出与大肠癌患者混合血清和对照混合血清反应性存在差异的克隆。再用30例大肠癌患者血清和30例对照血清复筛出能区别大肠癌血清和对照血清的克隆。最后再应用60例大肠癌患者血清和60例对照血清对这些筛选出的克隆早期筛查大肠癌能力进行验证。

3、同时对相关克隆，进行插入片段的序列测定，将其序列进行BLASTn和BLASTp比对，通过Chilibot对比对基因功能、与肿瘤关系进行文献挖掘；选择一个克隆多肽序列所比对上的蛋白，对其在大肠癌组织中的表达情况进行免疫组化分析，辅证该克隆的诊断学意义。结果：(1)发现6个噬菌体克隆，应用这6个噬菌体克隆对肺癌进行联合检测，采用logistic回归分析绘制的ROC曲线下面积(AUC)可达到0．956，对早期肺癌患者所绘制AUC也可达到0．888。其中290号克隆的多肽序列所比对上的蛋白OLFMl在肺腺癌细胞中高表达，在正常肺组织和其他病理类型的肺癌组织中均不表达。(

4、2)所建大肠癌噬菌体展示肽库的滴度为3．0X106pfu，经PCR鉴定其重组率为60％，库容为1．8×106pfu，初筛共19个与大肠癌患者混合血清和对照混合血清反应性存在差异的噬菌体克隆。测序后，比对的基因中Chilibot中文献报道，12个基因与肿瘤相关，7个功能未知。(3)复筛5个能区别大肠癌血清和对照血清的大肠癌相关噬菌体肽，应用这5个噬菌体展示肽进行联合检测时，采用logistic回归分析绘制的ROC曲线下面积(AUC)可达到0．981，组内第二军医大学硕士学位论文Leave．One-Out-Cross-Validation后其AUC可达到0．962。

5、(4)其中174号噬菌体多肽序列所比对上的蛋白COX6BI经免疫组化验证在直肠管状腺癌细胞中相对于配对癌旁组织中出现高表达，蛋白主要定位于细胞胞膜和细胞浆。结论：(1)本研究从肺癌噬菌体展示肽库中形成了一个可用于早期筛查肺癌自身抗体的血清标志群，可用于对肺癌患者进行血清学筛查。发现OLFMI蛋白在肺腺癌细胞中高表达，而在其他类型的肺癌组织和正常肺组织中均不表达，可能是一个肺腺癌相关的肿瘤抗原。(2)构建了以汉族人为基础的大肠癌噬菌体展示肽库，形成了一个可用于早期筛查CRC肿瘤抗原自身抗体的血清标志群，发现COX681蛋白表达在直肠管状腺癌细胞中高表达，可能是一个

6、相关的肿瘤抗原。关键词肺癌大肠癌，噬菌体展示肽库，肿瘤相关抗原，分子标志肺癌和大肠癌早期筛查自身抗体标志群的筛选Abstractobjective：Cancerisaseriousthreattohumanhealth．Earlydiagnosisandradicalsurgeryarethekeystoavoidmetastasis，prolongsurvivallimeandimprovethefiveyearssurvivalrateofpatients．Regularscreeninghi曲一riskgroupsisallimportantguarant

7、eetoachieveearlydiagnosisofthepatients．TheeffectiveserologicalscreeningmethodsoflungcancerandcolorectalCanCerislackcurrently,thenexploreofearlyscreeningmethodinlungcancerandcolorectalCanCerareparticularlyimportant．Methods：(1)From22selectedindividualphageclones，cloneswimhigherreactivi

8、tywith30case