种子蛋白体靶向表达口服重组胰岛素原载体构建及转化水稻

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1、中国水稻科学(ChinJRiceSci),２０１５,２９(５):４８１－４８９http://www．ricesci．cnDOI:１０．３９６９/ji．ssn．１００１Ｇ７２１６．２０１５．０５．００５４８１种子蛋白体靶向表达口服重组胰岛素原载体构建及转化水稻唐湧洲俞越赵艳∗(浙江工商大学食品与生物工程学院,杭州３１００１８;∗通讯联系人,EＧmail:yanzhao９９１８＠１６３．com)ConstructionofSeedProteinBodyTargetedExpressionVectorandTransformationRiceforOralRecombin

2、antProinsulinTANGYongＧzhou,YUYue,ZHAOYan∗(CollegeofFoodScienceandBiotechnology,ZhejiangGongshangUniversity,Hangzhou３１００１８,China;∗Correspondingauthor,EＧmail:yanzhao９９１８＠１６３c．om)TANGYongzhou,YUYue,ZHAOYan．Constructionofseedproteinbodytargetedexpressionvectorandtransformationricefororalre

3、combinantproinsulin．ChinJRiceSci,２０１５,２９(５):４８１Ｇ４８９．Abstract:Developentoforalrecombinantproinsulinusingriceseedsasbioreactorshowsgoodapplicationfuture．AfusiongeneofthecholeratoxinBsubunitandhumanproinsulin(CTBIN)withanendoplasmicreticulumretentionsignal(KDEL)atCＧterminuswasdesignedfori

4、tsselfＧmaturationprocessinhumangutandsynthesizedaccordingtotheoptimizedcodeusagebiasofrice．ThesyntheticCTBINwasintroducedtothevectorpCAMBIA１３０２andexpressedunderthe２．４kbpromotersequenceofriceglutelinGluB１withitssignalpeptide(pGluB１sig),whichwasclonedbyPCRfromthejaponicariceNipponbaregen

5、ome．ThusthericeseedproteinbodytargetedexpressionvectorpCAMBIA１３０２ＧpGluB１sigＧCTBINＧNosfororaldeliveryofrecombinantproinsulinwasconstructedandthentransformedintoNipponbareviaAgrobacteriumＧmediatedmethod．Totally４６transgenicriceplantswereobtainedandtheexpressionofthefusionproteinCTB::Human

6、proinsulininriceseedswasdetectedbyWesternＧblot．Keywords:oralrecombinantproinsulin;proteinbodytargetedexpression;vectorconstruction;transformaiton;rice唐湧洲,俞越,赵艳．种子蛋白体靶向表达口服重组胰岛素原载体构建及转化水稻．中国水稻科学,２０１５,２９(５):４８１Ｇ４８９．摘要:应用水稻种子生物反应器开发口服重组胰岛素原具有重要应用前景.通过分子设计保证重组胰岛素原在人体肠道内的自主加工成熟,根据水稻密码子偏爱性人工

7、合成了霍乱毒素β亚基和人胰岛素原的融合基因(choleratoxinBsubunitfusedwithhumanproinsulin,CTBIN),并在C末端添加内质网滞留信号KDEL.通过PCR技术从粳稻品种日本晴全基因组中克隆谷蛋白启动子及其信号肽序列pGluB１sig(GluB１promoteranditssignalpeptide)用于驱动融合基因CTBIN的表达,插入载体pCAMBIA１３０２,构建了水稻种子蛋白体靶向表达口服重组胰岛素原的载体pCAMBIA１３０２ＧpGluB１sigＧCTBINＧNos.采用农杆菌介导法转化日本晴,获得了４６株转基因