水稻vdac3蛋白的可溶性外源表达及纯化

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1、安徽农业科学，JournalofAnhuiAgri．Sci．2014，42(13):3815－3818责任编辑石金友责任校对李岩水稻VDAC3蛋白的可溶性外源表达及纯化刘洋，王春台，刘学群，程钢(中南民族大学/武陵山区特色资源植物种质保护与利用湖北省重点实验室，湖北武汉430074)摘要［目的］获得外源表达的可溶性水稻VDAC3蛋白。［方法］将osvdac3基因克隆到含有GST标签的pGEX－4T－1原核表达载体中，转化入BL21表达菌株，经IPTG诱导，并使用SDS-PAGE和WesternBlot检测分析表达产物，通过GlutathioneＲesin亲和层

2、析系统纯化获得较纯的目的蛋白。［结果］试验成功构建了pGEX-4T-1-osvdac3原核表达载体并转化大肠杆菌。通过SDS-PAGE和WesternBlot试验证实56kD处的蛋白条带是具有可溶性表达的VDAC3蛋白。［结论］经GlutathioneＲesin亲和层析系统纯化得到可溶性带GST标签的VDAC3蛋白。该研究结果为水稻VDAC蛋白的功能研究进一步奠定了基础。关键词原核表达;GST标签;亲和纯化中图分类号S188文献标识码A文章编号0517－6611(2014)13－03815－04ExpressionandPurificationofSolubl

3、eOsVDAC3invitroLIUYang，CHENGGangetal(South-centralUniversityforNationalities/HubeiProvincialKeyLaboratoryforProtectionandApplicationofSpecialPlantsinWulingAreaofChina，Wuhan，Hubei430074)Abstract［Objective］ToachieveactivatedOsVDAC3proteininvitro．［Method］Therecombinantprokaryoticexpres

4、sionvectorpGEX-4T-1-os-vdac3withtheGST-tagwasconstructedandtransformedintoE．coli．TheGst-taggedOsVDAC3proteinwasinducedwithIPTGinE．colistrainBL21，andconfirmedbySDS-PAGEandWestern-Blotanalysis．Inaddition，theGST-taggedrecombinantOsVDAC3proteinwaspurifiedbyGlu-tathioneresin．［Ｒesult］Ther

5、esultsshowedthattherecombinantprokaryoticexpressionvectorpGEX-4T-1-osvdac3wasconstructedandtrans-formedintoE．colisuccessfully．TheresultsofSDS-PAGEandWesternBlotshowedabandinthe56kDandindicatedtheGST-tagOSVDAC3proteinwaspartlyexistedinthesolublecomposition．［Conclusion］TheGST-tagOsVDA

6、C3proteinwasisolatedandpurifiedbyusingGlutathioneＲesin．TheresearchlaidafoundationforthefurtherstudyofthefunctionofVDACintherice．KeywordsProkaryoticexpression;GSTtag;Affinitypurification电压依赖性阴离子通道(voltage-dependentanionchan-为跨膜蛋白，在原核表达时大多以包涵体的形式存在。虽然nel，VDAC)是线粒体外膜高度的保守的，最丰富的蛋白，在可以通过

7、蛋白变性等方法可以获得可溶性蛋白，但这样得到所有的真核生物中都存在。在调节代谢物在线粒体与细胞的可溶性蛋白常常会带来蛋白结构上的改变，不利于后期的［1－2］［12］质之间的运输具有重要的作用。在植物中，烟草中至少进一步功能研究。因此，试验以前期得到的与水稻生殖有3种亚型，拟南芥和百脉根中发现有5种不同的亚型。较发育相关的osvdac3基因为对象，构建pGEX-4T-1-osvdac3原酵母与哺乳动物，植物中有更多的VDAC异构形式，暗示植核表达载体并尝试不同的IPTG诱导条件，纯化得到可溶性［3－6］物VDAC具有多种不同的功能。实验室前期工作证明，GST-O

8、sVDAC3融合蛋白，以期为下一步获取