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1、棉花学报CottonScience2013袁25渊4冤院309~315棉花29启动子克隆及表达分析*张文香袁范术丽袁宋美珍袁庞朝友袁魏恒玲袁喻树迅渊中国农业科学院棉花研究所袁河南安阳455000冤摘要院以实验室克隆的29渊GeneBank登录号院JQ682642冤基因的cDNA序列Blast搜索雷蒙德氏棉的基因组序列袁根据Blast结果设计引物袁克隆到起始密码子上游-19位开始的1316bp的序列曰利用PlantCARE启动子在线分析软件预测其含有核心启动子元件TATA-box和CAAT-box袁并含有光尧温尧赤霉素尧水杨酸尧生长素等的响应
2、元件遥通过替换pBI121载体上的CaMV35S启动子构建了29启动子与基因的融合表达载体并转化拟南芥袁组织化学染色分析发现其在14d幼苗的根和叶中都有表达袁在萼片尧花瓣尧雌蕊尧果瓣中也表达袁而在雄蕊和种子中不表达遥综上所述袁我们推测29可能与各种开花途径有关袁与萼片尧花瓣尧雌蕊等花器官的发育有关袁还可能与果实是否开裂有关遥关键词院启动子曰GUS染色曰瞬时表达曰表达分析中图分类号院S562.035.3文献标志码院A文章编号院1002-7807(2013)04-0309-07*ZHANGWen-xiang,FANShu-li,SONGMei-
3、zhen,PANGChao-you,WEIHeng-ling,YUShu-xun(455000,)WeusedthecDNAsequenceof29asasearchquerytoBLASTthegenomesequencesofL.WedesignedtheprimerstoclonethepromoteraccordingtotheBLASTresults.Weobtaineda1316-bpsequenceup-streamfromthe-19siteofthestartcodon.Sequenceanalysisshowedthat
4、thispromoterregioncontainedaTATA-boxcoreele-ment,aCAAT-box,andother-actingelements,includinganAuxRRcore,aTCAelement,TC-richrepeats,anHSE,BoxI,aGAREmotif,andaTGAelement;theseelementsareinvolvedinauxin,salicylicacid,defenseandstress,heat,light,andgib-berellinresponses,respec
5、tively.WereplacedtheCaMV35Spromoterinthe21vectorwiththe1316-bppromotersequencetoconstructafusionvectorcontainingthe29promoterconnectedtothegene.Thefusionvectorwasdesignatedas121.GUShistochemicalstaininganalysisoftransgeniccarryingthepSVP121vectorshowedthatthepro-moterwasac
6、tiveintherootsandleavesof14-day-oldseedlingsandinfloralorgans(sepals,petals,andpistils).Italsoshowedactivityinsiliquevalves,butnotinstamensandseeds.Theseresultssuggestthat29mayberegulatedbylight,temper-ature,andhormones,anditmayalsoparticipateinthedevelopmentofsepals,petal
7、s,andpistils.Whetherornotthesiliqueswillbedehiscentmayberelatedtothefunctionof29becauseoftheactivityofitspromoterinthesiliquevalves.promoter;GUSstaining;transientexpression;expressionanalysis启动子是位于基因上游5'端的DNA序列袁CaMV35S启动子袁它虽然来自烟草花叶病毒袁但能够活化RNA聚合酶袁使之与模板DNA准确地是能够驱动外源基因在植物的各个组
8、织和生长[1][2-4]结合并启动下游基因的表达袁控制着下游基因发育阶段表达袁是研究基因功能的一个有力工在特定的组织尧空间和时间的表达遥根据启动子具遥此外袁越来越多的组织特异型和
