大鲵感染虹彩病毒的诊断和治疗

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1、《河北渔业》２０１４年第１２期（总第２５２期）　　　　　　　　　　　　　　　　　　○病害防治ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００４－６７５５．２０１４．１２．０１５大鲵感染虹彩病毒的诊断和治疗贾秋红（黄河水产研究所，陕西西安７１００８６）摘要：２０１３年７月，陕西省汉中某大鲵养殖场发生以大鲵体表和四肢多处溃烂并伴有出血为特征的疾病，染病大鲵大量死亡。经临床观察、病理解剖及实验室检测，最后确诊病原为大鲵虹彩病毒。通过采取综合防治措施，养殖场大鲵疫情得到有效控制。关键词：大鲵虹彩病毒；诊断；防治大鲵（Ａｎｄｒｉａｓｄａｖｉｄｉａｎｕｓ），俗称娃娃鱼，属３实验室检测两栖纲有尾目隐鳃鲵科，是我

2、国特有的珍稀有尾两栖动物，为国家二级保护动物，有很重要的科研３．１患病大鲵虹彩病毒的细胞扩增检测价值及药用和营养价值。近年来，随着大鲵人工取病死大鲵的肝、肾组织各０．５ｇ于研磨器养殖不断发展，各种疾病也不断暴发，尤其是病毒中加入２ｍＬ无菌水在低温下研磨制成悬液，转性疾病，给养殖户造成惨重的经济损失。２０１３年移至１５ｍＬ离心管，放入－８０℃反复冻融３次，７月，陕西省商洛市洛南县某大鲵养殖场发生了然后转移至１．５ｍＬ离心管中，１２０００ｒ／ｍｉｎ离心以大鲵体表和四肢多处溃烂、充血及出血为特征５ｍｉｎ，取上清液作为病毒提取液备用。取一瓶已的疾病，经过临床症状观察、病理解剖及实验室检培养了４８ｈ的Ｅ

3、ＰＣ细胞，弃去培养液，吸取０．２测，诊断病原为大鲵虹彩病毒。现将诊治结果报ｍＬ病毒提取液接种到此培养瓶中，吸附１ｈ，加道如下。入含２％胎牛血清的ＭＥＭ培养液于２５℃培养，同时做空白对照，２４ｈ有ＣＰＥ反应，７２ｈ后ＣＰＥ１基本情况及临床症状反应强烈，细胞已完全脱落，确定患病大鲵为病毒２０１３年７月，陕西省商洛某大鲵养殖场大鲵感染，见图１和图２。突发异常，行动缓慢，摄食减少，前、后肢严重肿胀、溃烂且局部出血，采用肌肉注射青霉素和庆大霉素、头孢噻吩以及中药浸泡等治疗措施均无效，并在治疗过程中陆续死亡，且随着时间的推移，死亡数量越来越大。２病理剖检对病死大鲵进行病理剖检，其结果如下：病死大鲵头部、前

4、、后肢、尾部严重溃烂、肿胀，颈部、腹部、下颌均有大量出血点，腹腔内有淡黄色的积图１病毒提取液接入ＥＰＣ２４ｈ后，水，肝脏肿大且松软无弹性，胆囊充盈，脾脏、肾脏观察到有明显的病变细胞肿大有白点。基金项目：陕西省科学计划项目（２０１２Ｋ０１－１８）。作者简介：贾秋红（１９７７－），女，水产养殖工程师，从事水产养殖与鱼病学研究。ｊｉａｘｉｕ＿００１＠１６３．ｃｏｍ—４１—《河北渔业》２０１４年第１２期（总第２５２期）　　　　　　　　　　　　　　　　　　○病害防治图２病毒提取液接入ＥＰＣ７２ｈ后，观察到ＣＰＥ１：标准病毒扩增结果；２：阴性对照；反应强烈，ＥＰＣ细胞已完全病变脱落３：病鲵病毒提取液扩增结

5、果。４诊断结果图３结果与标准病毒株ＰＣＲ检测对比３．２患病大鲵虹彩病毒的ＰＣＲ检测取前面已经制备的病毒提取液和阳性对照病５防治措施毒株（阳性对照病毒株选用本实验室分离的大鲵确诊后，将患病大鲵与健康大鲵进行严格隔虹彩病毒（Ｃｈｉｎｅｓｅｇｉａｎｔｓａｌａｍａｎｄｅｒｉｒｉｄｏｖｉｒｕｓ，离，对养殖场、养殖水体及养殖用具等用聚维酮碘ＣＧＳＩＶ））。按照病毒ＤＮＡ小剂量抽提试剂盒的和高锰酸钾彻底消毒。对饵料鱼用高锰酸钾进行说明书提取组织和细胞分离病毒的ＤＮＡ。浸泡，对未患病大鲵注射大鲵虹彩病毒灭活疫苗根据ＧｅｎＢａｎｋ已发表的蛙病毒属的代表种０．２ｍＬ／ｋｇ，每隔２周注射一次，连续注射３次。ＦＶ３主

6、衣壳蛋白（ＭＣＰ）基因高度保守区序列（登对患病大鲵注射大鲵虹彩病毒灭活疫苗，注射量录号：ＡＹ５４８４８４）设计引物用于检测，引物由宝为０．２ｍＬ／ｋｇ·次，每隔２周注射一次，连续注射生物工程（大连）有限公司合成。序列如下：３次，期间再注射我们自制的中西药结合的抗病ＣＧＳ－Ｔ－Ｆ：５′－ＧＡＣＴＴＧＧＣＣＡＣＴＴＡＴ－毒药物，注射量为２ｍＬ／ｋｇ·次，连续注射三天。ＧＡＣ－３′；用药一周后死亡数量逐渐减少。两周后，已无死ＣＧＳ－Ｔ－Ｒ：５′－ＧＴＣＴＣＴＧＧＡＧＡＡＧＡ－亡现象，发病的大鲵部分开始摄食，疫情得到了有ＡＧＡＡ－３′；效的遏制。总体积为２５μＬ的反应体系为：０．２５μＬＴａＫａＲａＥ

7、ｘＴａｑ（５Ｕ／μＬ），２．５μＬ１０×ＥｘＴａｑ６讨论２＋Ｂｕｆｆｅｒ（ＭｇＰｌｕｓ），０．２５ｎｍｏｌ／ＬｄＮＴＰｓ１μＬ，该养殖场大鲵被确诊为大鲵虹彩病毒感染，引物（５０ｐｍｏｌ／Ｌ）各０．５μＬ，ＤＮＡ模板３μＬ，反大鲵虹彩病毒（ＣＧＳ１Ｖ）是虹彩病毒科Ｉｒｉｄｏｖｉｒｉ－应条件为：９５℃预处理３ｍｉｎ，进行３０个循环，每个循环反应包括９５℃３０ｓ，５２℃３０ｓ，７２℃１．５ｄａｅ蛙病毒属