大鲵感染虹彩病毒的诊断和治疗-畜牧渔业论文

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1、大鋭感染虹彩病毒的诊断和治疗■畜牧渔业论文大覲感染虹彩病毒的诊断和治疗贾秋红（黄河水产硏究所，陕西西安710086）摘要:2013年7月，陕西省汉中某大覲养殖场发生以大覲体表和四肢多处溃烂并伴有出血为特征的疾病，染病大覲大量死亡。经临床观察、病理解剖及实验室检测，最后确诊病原为大覲虹彩病毒。通过采取综合防治措施，养殖场大覲疫情得到有效控制。关键词：大覲虹彩病毒；诊断；防治基金项目:陕西省科学计划项目（2012K01-18X作者简介：贾秋红（1977-），女，水产养殖工程师，从事水产养殖与鱼病学研究。[e

2、mailprotected]D01:10.3969/j.issn.l004-6755.2014.12.015大覲（Andriasdavidianus），俗称娃娃鱼,属两栖纲有尾目隐鲤覲科,是我国特有的珍稀有尾两栖动物，为国家二级保护动物，有很重要的科硏价值及药用和营养价值。近年来,随着大覲人工养殖不断发展,各种疾病也不断暴发，尤其是病毒性疾病,给养殖户造成惨重的经济损失。2013年7月，陕西省商洛市洛南县某大覲养殖场发生了以大鱼兒体表和四肢多处溃烂、充血及出血为特征的疾病,经过临床症状观察、病理解剖及实

3、验室检测，诊断病原为大覲虹彩病毒。现将诊治结果报道如下。1基本情况及临床症状2013年7月，陕西省商洛某大覲养殖场大覲突发异常z行动缓慢z摄食减少,前、后肢严重肿胀、溃烂且局部出血，采用肌肉注射青霉素和庆大霉素、头抱囉吩以及中药浸泡等治疗措施均无效，并在治疗过程中陆续死亡，且随着时间的推移,死亡数量越来越大。2病理剖检对病死大覲进行病理剖检,其结果如下：病死大覲头部、前、后肢、尾部严重溃烂、肿胀，颈部、腹部、下颌均有大量出血点，腹腔内有淡黄色的积水，肝脏肿大且松软无弹性,胆囊充盈,脾脏、肾脏肿大有白点。

4、3实验室检测3.1患病大覲虹彩病毒的细胞扩增检测取病死大鱼兒的肝、肾组织各0.5g于研磨器中加入2mL无菌水在低温下硏磨制成悬液，转移至15mL离心管，放入-80弋反复冻融3次，然后转移至1.5mL离心管中，12000r/min离心5min,取上清液作为病毒提取液备用。取一瓶已培养了48h的EPC细胞，弃去培养液，吸取0.2mL病毒提取液接种到此培养瓶中，吸附1h,加入含2%胎牛血清的MEM培养液于25弋培养z同时做空白对照，24h有CPE反应，72h后CPE反应强烈，细胞已完全脱落，确定患病大鱼見为病

5、毒感染/见图1和图2O图1病毒提取液接入EPC24h后.观察到有明显的病变细胞图2病毒提取液接入EPC72h后，观察到CPE反应强烈，EPC细胞已完全病变脱落3.2患病大覲虹彩病毒的PCR检测取前面已经制备的病毒提取液和阳性对照病毒株(阳性对照病毒株选用本实验室分离的大覲虹彩病毒(Chinesegiantsalamanderiridovirus,CGSIV)X按照病毒DNA小剂量抽提试剂盒的说明书提取组织和细胞分离病毒的DNAO根据GenBank已发表的蛙病毒属的代表种FV3主衣壳蛋白(MCP)基因高度

6、保守区序列（登录号：AY548484）设计引物用于检测,引物由宝生物工程（大连）有限公司合成。序列如下：CGS-T-F:5,-GACTTGGCCACTTATGAC-3,;CGS-T-R:5'・GTCTCTGGAGAAGAAGAA-31;总体积为25

7、JL的反应体系为：0.25

8、JLTaKaRaExTaq（5U/pL）z2.5pL10xExTaqBuffer（Mg2+Plus）,0.25nmol/LdNTPs1pLz引物（50pmol/L）各0.5pL,DNA模板3pL,反应条件为:95°C预处理3min

9、,进行30个循环,每个循环反应包括95°C30s,52°C30sr72°C1.5min,循环完成后，72°C充分延伸10min。PCR产物经1.5%的琼脂糖凝胶电泳，用Gene-Genius凝胶成像系统拍照，病覲病毒提取液检测结果呈阳性，确定患病大覲为虹彩病毒（CGSIV）感染，见图3。经过流行病学调查、临床症状观察、病理解剖及实验室检测,该养殖场发生的以大覲体表和四肢肿大、多处溃烂、充血、出血为特征的疾病，诊断为大鋭虹彩病毒（CGSIV）感染的病毒病。7005(M)3001001：标族病毒扩增结果*2

10、：阴性对幕；3：病貌病毒提取液扩增结果。4诊断结甲图3结果与标准病毒株PCR检测对比5防治措施确诊后，将患病大鱼兒与健康大覲进行严格隔离，对养殖场、养殖水体及养殖用具等用聚维酮碘和高猛酸钾彻底消毒。对饵料鱼用高猛酸钾进行浸泡，对未患病大覲注射大覲虹彩病毒灭活疫苗0.2mL/kg,每隔2周注射一次，连续注射3次。对患病大覲注射大覲虹彩病毒灭活疫苗，注射量为0.2mL/kg-次,每隔2周注射一次，连续注射3次，期间再注射我们自制的中西药结合的抗